Alfa-amilazės milteliaisistemos pavadinimas yra 1,4- - D-gliukano gliukano hidrolazė, dar žinoma kaip suskystinta amilazė, suskystintas fermentas - 1,4-dekstrinazė. Gelsvai rudi kieti milteliai arba nuo geltonai rudos iki tamsiai rudos spalvos skystis, kurio vandens kiekis yra 5–8 procentai. Tirpsta vandenyje ir praskiestame buferiniame tirpale, beveik netirpsta etanolyje. Biocheminiai tyrimai. Jis gali greitai suskystinti krakmolą ir sudaryti mažą molekulinę masę.
1. Maisto perdirbimas: kaip saugus ir efektyvus miltų pramonės geriklis.Alfa-amilazės milteliaigali pagerinti duonos kokybę. A-amilazė suskystėja ir susicukruoja, todėl dažnai naudojama kaip saldiklis gėrimų pramonėje. Šaltuose gėrimuose sumažinamas šaltų gėrimų klampumas ir padidinamas sklandumas, kad būtų užtikrintas daug krakmolo turinčių šaltų gėrimų skonis. Aukštos temperatūros a-amilazė, kaip naujo tipo skystinimo fermentų preparatai, plačiai naudojama fermentacijos pramonėje. Jo terminį stabilumą lemia paties baltymo terminis stabilumas, todėl jis plačiai naudojamas alkoholio ir alaus gamybos pramonėje.
2. Pašarų pramonė: eksogeninės a-amilazės pridėjimas į racioną gali padėti jauniems gyvūnams virškinti ir naudoti krakmolą, o jo augimo efektyvumas ir pašarų konversijos greitis yra labai naudingi. Gyvos Escherichia coli kultūros, gaminančios a-amilazę, pridėjimas į broilerių racioną gali atlikti antibiotikų augimo skatintoją, pagerinti žarnyno morfologiją ir pagerinti gamybos efektyvumą.
3. Vandens plovimo pramonė: kadangi krakmolas yra pigus, lengvai gaunamas ir lengvai pašalinamas, jis naudojamas kaip apsauginė medžiaga, apsauganti nuo siūlų trūkimo šiuolaikiniame pluošto gamybos procese, o vėliau apdorojama a-amilaze, kuri gali selektyviai pašalinti krakmolą. srutos nepažeidžiant verpalų pluošto, taip pat gali skaidyti krakmolą į vandenyje tirpų dekstriną, todėl jį lengva nuplauti.
4. Farmacijos pramonė: kadangi Aspergillus niger a-amilazė yra atspari rūgštims, ji gali būti naudojama gaminant vaistus, padedančius virškinti, sukurti rūgštims atsparią a-amilazę, tinkamą skrandžio rūgščiai aplinkai, ir ruošti virškinimą skatinančius vaistus.
5. Popieriaus pramonė: amilazė daugiausia naudojama popieriaus dangos krakmolo klampumui ir koncentracijai pagerinti popieriaus pramonėje. Pasta yra gera popieriaus danga, kuri gali pagerinti popieriaus kietumą ir stiprumą bei padidinti popieriaus trintį. Tačiau natūrali krakmolo koncentracija yra per didelė, kad būtų galima rūšiuoti popierių, todėl ją galima reguliuoti iš dalies skaidant krakmolą a-amilaze.
Iš skirtingų šaltinių - Yra tam tikrų amilazės savybių skirtumų, o grybai ir bakterijos daugiausia naudojami pramonėje - Amilazė. Šiuo metu amilazė plačiai naudojama pašarų, denatūruoto krakmolo ir krakmolo cukraus, kepimo, alaus gamybos, alkoholio pramonės, fermentacijos, tekstilės ir kitose pramonės šakose. Tai svarbus pramoninis fermentas.
6. Fermentų paruošimas. Iš Aspergillus niger pagaminti produktai daugiausia naudojami krakmolo sirupe, alkoholyje, aluje, sultyse, šokolado sirupe, kepiniuose, skystoje kavoje, vyne, gliukozei ir pieno produktams gaminti. Pagaminta iš Aspergillus oryzae, daugiausia naudojama krakmolo sirupo, alkoholio, alaus, kepinių, pieno produktų ir mėsos minkštinimui ruošti. Pagaminta iš mielių, daugiausia naudojama saldainių ir ledų gamyboje bei pieno produktų modifikavimui. Pagaminta iš Trichoderma, daugiausia naudojama sulčių, vyno, augalinio aliejaus ir alaus gamyboje. Pagaminta iš Rhizopus oryzae, ji daugiausia naudojama kaip pagalbinė medžiaga krakmolo sirupui, sultims ruošti, sūriui gaminti ir gliukozei gaminti.
7. Šis produktas gali katalizuoti krakmolo hidrolizę gaminant alų, ryžių vyną, padažą, mononatrio glutamatą ir antibiotikus, taip pat gali būti naudojamas gliukozės, maltozės ir dekstrino gamybai. Pagal Kinijos reglamentus, jis gali būti naudojamas fermentuoto vyno, distiliuoto vyno, alkoholio ir krakmolo sirupo gamyboje ir gali būti tinkamai naudojamas pagal gamybos poreikius.
8. Krakmolas suskystinamas į dekstriną, kuris naudojamas kūdikių maisto gamyboje, grūdų perdirbime, alaus gamyboje, sulčių perdirbime, Baijiu gamyboje ir kt. Tai vienas plačiausiai naudojamų ir vartojamų fermentų.
9. Alfa-amilazės milteliaigali hidrolizuoti - 1,4-gliukozidinį ryšį, savavališkai nupjauti skirtingo ilgio trumpos grandinės dekstriną ir nedidelį kiekį mažos molekulinės masės cukraus, tiesioginis krakmolas ir amilopektinas suyra netaisyklingai, todėl klampumas krakmolo pastos greitai mažėja.
Parengimasalfa-amilazės milteliai:
(1) Nešiklio pxmj19-aph213 paruošimas.
Vektoriaus pxmj{0}}aph213 kūrimo procesas yra toks:
Aph213 genas buvo amplifikuotas iš vektoriaus xk99e su pradmenimis aph213F ir aph213R. Naudoti šie gruntai:
aph213F:ccggatatcagcttcacgctgccgcaagcac
aph213R:ccgaagcttaattctgtttcctgtgtgaaattg
PGR sąlygos yra tokios: 95 laipsnių 4 min.; 95 laipsniai 30s, 62 laipsniai 30s, 72 laipsniai 1min, 35 ciklai; 72 laipsniai 7min.
Dėl minėtų pradmenų amplifikacijos aph213 geno amplifikacijos metu susidarė EcoRV lūžio taškas prieš aph213 geną ir HindIII lūžio taškas pasroviui. Aph213 geno nukleotidų seka parodyta SEQ ID Nr. 4; PCR produktas buvo išgautas ir suardytas naudojant EcoRV ir HindIII, o tada prijungtas prie vektoriaus pxmj-19, kuris taip pat buvo suardytas EcoRV ir HindIII per T4DNR ligazę, kad būtų gautas vektorius pxmj19-aph213.
Vektoriaus pxmj{0}}aph213 stiprinimo procesas yra toks:
A. Į 50 ml centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 3 ml LB auginimo terpės ir 1,5 ul 34 mg/ml chloramfenikolio antibiotiko;
B. Pasirinkite Escherichia coli DH5 su vektoriumi pxmj19-aph213. Perkelkite į aukščiau nurodytą terpę ir kultivuokite 37 laipsnių ir 230 aps./min. greičiu 12 valandų, kad sustiprintumėte pxmj19-aph213 plazmidę;
C. Išskirkite pxmj19-aph213 plazmidę pagal plazmidės išskyrimo rinkinio instrukcijas.
(2) Bacillus subtilis – amilazės geno amplifikacija ir modifikavimas.
Padauginta iš Bacillus subtilis genomo naudojant pradmenis AmyF ir AmyR – amilazės genui naudojami pradmenys:
AmyR:ccgctcgagtcagtggtggtggtggtggtgatggggaagagaaccgcttaag;
AmyF:ccgaagcttgaaaggaggacctaatgtttgcaaaacgattcaaaacc;
PGR sąlygos yra tokios: 95 laipsnių 4 min.; 95 laipsniai 30s, 62 laipsniai 30s, 72 laipsniai 2min, 35 ciklai; 72 laipsniai 7min.
Aukščiau paminėtų pradmenų konstrukcija leidžia: - Amilazės geno amplifikacijos metu - e3 SD seka susidaro prieš amilazės geną, o histidino žymė - pasroviui. Prieš srovę esanti restrikcijos endonukleazės vieta yra HindIII, o pasroviui esanti restrikcijos endonukleazės vieta yra XhoI;
(3) Rekombinantinio vektoriaus konstravimas.
PGR produktas buvo išgautas ir suardytas su XhoI ir HindIII, o tada prijungtas prie vektoriaus pxmj19-aph213, kuris taip pat buvo suardytas XhoI ir HindIII per T4 DNR ligazę, kad būtų gautas rekombinantinis ekspresijos vektorius pxmj19-aph. 213-amy.
(4) Rekombinantinių bakterijų konstravimas.
Rekombinantinis ekspresijos vektorius pxmj19-aph213-amy buvo perkeltas į Escherichia coli išankstiniam amplifikavimui. Auginimo terpė buvo LB terpė, o chloramfenikolio koncentracija buvo 50 ug/ml; Po ekstrahavimo jis buvo perkeltas į Corynebacterium glutamicum elektrinės transformacijos metodu ir kultivuojamas LBHIS regeneravimo terpėje 30 laipsnių temperatūroje, kai chloramfenikolio koncentracija buvo 30 ug/ml.
(5) Kultivuokite rekombinantines bakterijas ir išskiria ekspresiją – amilazę.
Išaugintus transformantus perkelkite į 250 ml trikampę kolbą, kurioje yra 50 ml terpės auginimui. Terpė yra BHI terpė. Kultūros būklė yra 30 laipsnių, 230 aps./min., 48 val.
（6） Alfa-amilazės milteliaiamilazės.
A. Centrifuguokite rekombinantinių bakterijų kultūrą 12000 aps./min., 4 laipsniais ir 5 min., kad gautumėte - Amilazės supernatantą.
B. Turės – amilazės supernatantas tiriamas afinine chromatografija. Pirmiausia subalansuokite nikelio kolonėlę su buferiu A – Amilazės supernatantas buvo filtruojamas ir įpilamas į subalansuotą nikelio kolonėlę, o po to trijų kolonėlių tūris buvo toliau subalansuotas buferiu A iki pradinio lygio; Išplaukite 100mmol B tirpalo, surinkite eliuuotą eliuatą ir surinkite 0,5 ml iš vieno mėgintuvėlio;
Buferis A: 300mM NaCl, 20 mM Tris, pH8,0 buferis; buferis B: 300 mM NaCl, 250 mM imidazolo, 20 mM Tris, pH 8,0 buferis.
C. Tiems, kurių sudėtyje yra - Amilazės eliuatas nusūdomas per druskos šalinimo kolonėlę, kad būtų gautas išgrynintas - Amilazės tirpalas, laikomas - 20 laipsnio;
Druskos šalinimui naudojamas buferis yra 50mM PBS buferis, kurio pH 7,0.
Populiarus Žymos: alfa-amilazės milteliai cas 9000-90-2, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, dideliais kiekiais, parduoti