Iptg milteliaigali būti naudojamas vietinio anestetiko veikimo vietai, jis naudojamas kaip sklaidos priemonė po-operaciniam žaizdos skausmui ir opų skausmui malšinti. Molekuliniai biologiniai reagentai, dažniausiai naudojami mėlynos ir baltos dėmės atrankoje ir IPTG sukelta baltymų ekspresija bakterijose. IPTG, pilnas pavadinimas izopropil- - D-tiogalaktozidas, CAS 367-93-1, molekulinė formulė C9H18O5S, molekulinė masė 384,37 daltonų, priklauso mažų molekulių junginiams. Balti arba beveik balti milteliai, mažai tirpūs vandenyje, bet geriau tirpūs organiniuose tirpikliuose. Molekulėse yra joninių grupių, todėl jos turi tam tikrą laidumo laipsnį vandenyje. Stabilus kambario temperatūroje, bet lengvai suyra esant aukštai temperatūrai arba stiprioms rūgštims ir šarmams. Nėra ryškaus kvapo, tačiau naudojimo metu gali sklisti nedidelis organinių junginių kvapas. Tai dažniausiai naudojamas induktorius, naudojamas baltymų ekspresijai bakterijose sukelti. Medicininėje diagnozėje IPTG gali būti naudojamas kaip fluorescencinis zondas arba chromogeninis agentas, skirtas aptikti konkrečias molekules ar audinius mėginiuose. Derindamas su tikslinėmis molekulėmis, IPTG gali generuoti fluorescencinius signalus arba spalvų pokyčius, suteikdamas tvirtą paramą ligos diagnozei.
|
Morfologinis |
Kristaliniai milteliai |
|
Spalva |
Baltas |
|
Lydymosi temperatūra |
105 laipsnių C |
|
Virimo temperatūra |
350,9 ° C (apytikslis įvertinimas) |
|
Tankis |
1,3329 (apytikslis įvertinimas) |
|
Laikymo sąlygos |
2-8 laipsniai C |
|
tirpumo alkoholis |
tirpus tirpus 40 dalių tirpiklio |
|
Rūgštingumo koeficientas ( pKa ) |
13.00 ± 0.70 ( Numatyta ) |
|
Tirpsta vandenyje |
50 mg / ml |
|
Pliūpsnio taškas |
197,8 laipsnių |
|
Tirpumas |
1.6g/l |
|
Garų tankis |
5,21 (prieš orą) |
|
Lūžio rodiklis |
1.5060 ( apskaičiuota ) |
|
|
|
Iptg milteliai,Fizikiniai parametrai, Mp. : 114–121 laipsnis C , Naudojimo aprašymas , Įprasti molekulinės biologijos reagentai, dažniausiai naudojami mėlynai -baltai atrankai ir IPTG-sukeltai baltymų ekspresijai bakterijose. , Pakuotės specifikacijos , 1G, 5G, 25G, 100G, 1KG , Laikymo sąlygos
2-8 laipsnių šaldomas, apsaugotas nuo šviesos , Pavojaus aprašymas , Pavojaus kodas : Xi , Rizikos lygis : R36 / 37 / 38 , Saugos lygis : S23-24 / 25-36.
IPTG dažniausiai naudojamas klonavimo eksperimentuose, kuriems reikia sukelti -galaktozidazės aktyvumą. Jis dažnai naudojamas kartu su X-Gal arba Bluo-Gal mėlynai-baltai rekombinantinių bakterijų kolonijų atrankai, kurią Chemicalbook gali paskatinti ekspresuoti lac operoną E. coli. IPTG prisijungia prie lacI represoriaus baltymo ir keičia jo konformaciją, kad būtų išvengta -galaktozidazės koduojamo lacZ geno slopinimo.
IPTG, pilnas pavadinimas izopropil{0}}D-tiogalaktozidas yra plačiai naudojamas induktorius, plačiai naudojamas baltymų ekspresijai sukelti ir reguliuoti. Dėl savo unikalios struktūros ir funkcijos IPTG paprastai ruošiamas naudojantIptg milteliaisintezės metodai laboratorijoje.
Sintetinis maršrutas
1. Glikozidų sintezė:
Pirmoji sintezė -D-tiogalaktozidas paprastai sintetinamas glikozidų sintezės metodu, kondensuojant galaktozę su atitinkamomis bazėmis (pvz., izopropilu). Šiam veiksmui reikia naudoti apsaugines grupes, kad tolimesnėse reakcijose nesusidarytų šalutiniai produktai.
2. Fosforilinimo reakcija:
Glikozidų sintezės pagrindu fosfatų grupės įvedamos per fosforilinimo reakciją, kad būtų gautas izopropilo grupės - -D-tiogalaktozido-5'-fosfato esteris. Šiam žingsniui reikia naudoti fosfatus ir atitinkamus anhidridus arba rūgštis.
3. Apsaugos pašalinimo grupė:
Atliekant apsaugą nuo grupės reakcijos, glikozido apsauginė grupė pašalinama, kad būtų gautas tikslinis produktas izopropil- - D-tiogalaktozidas. Šiam veiksmui reakcijai palengvinti reikia naudoti rūgšties arba šarmo tirpalą.
Eksperimento žingsniai:
Paruoškite reagentus ir instrumentus:
Paruoškite reikiamus cukrų, bazes, apsaugines grupes, fosfatus, anhidridus ar rūgštis, tirpiklius ir kitus reagentus, taip pat reikiamus eksperimentinius instrumentus, tokius kaip maišytuvai, termometrai, spektrofotometrai ir kt.
Glikozidų sintezė:
Pakaitinkite ir maišykite galaktozę su atitinkamomis bazėmis tirpiklyje, įpilkite katalizatoriaus ir paskatinkite kondensacijos reakciją. Šiam veiksmui reikia griežtai kontroliuoti temperatūrą ir maišymo laiką, kad būtų užtikrinta sklandi reakcijos eiga.
Fosforilinimo reakcija:
Susintetinti glikozidai kaitinami ir maišomi su fosfatu, anhidridu arba rūgštimi tirpiklyje, įdedama katalizatoriaus, skatinančio fosforilinimo reakciją. Šiame etape reikia kontroliuoti temperatūrą ir maišymo laiką, kartu atkreipti dėmesį į tirpiklio poliškumą ir dozavimą, kad būtų užtikrinta reakcijos eiga ir produkto susidarymas.
Apsaugos pašalinimo grupė:
Pašalinkite apsauginę grupę iš fosforilinimo produkto rūgšties arba šarmo tirpale, kad gautumėte tikslinį produktą izopropil{0}} D-tiogalaktozidą. Šiame etape reikia kontroliuoti pH vertę ir temperatūrą, kartu atkreipti dėmesį į tirpiklio poliškumą ir dozavimą, kad būtų užtikrinta reakcijos eiga ir produkto susidarymas.
Atskyrimas ir valymas:
Tikslinis produktas atskiriamas nuo reakcijos mišinio naudojant chromatografiją kolonėlėje, perkristalizaciją ir kitus atskyrimo bei gryninimo būdus. Šiam veiksmui reikia atkreipti dėmesį į eksploatavimo sąlygas, tokias kaip temperatūra, tirpiklio dozavimas, srauto greitis ir kt., kad būtų užtikrintas produkto grynumas ir išeiga.
Analizė ir identifikavimas:
Tikslinio produkto struktūrinis identifikavimas atliekamas naudojant analitinius metodus, tokius kaip branduolinis magnetinis rezonansas ir masės spektrometrija. Šiam veiksmui reikia naudoti atitinkamus instrumentus, įrangą ir technines priemones gaminio struktūrai ir grynumui patvirtinti.
Iptg milteliaipilnas pavadinimas izopropil{0}} D-tiogalaktozidas yra plačiai naudojamas induktorius, plačiai naudojamas baltymų ekspresijai sukelti ir reguliuoti.
1. Baltymų ekspresijos indukcija:
IPTG vaidina svarbų vaidmenį baltymų ekspresijos indukcijoje. Tai plačiai naudojamas induktorius, galintis efektyviai sukelti specifinių genų ekspresiją bakterijose ir taip per trumpą laiką gauti norimą tikslinį baltymą. Jo veikimo mechanizmas yra prisijungti prie bakterijų lacI geno, slopinti jo transkripciją reguliuojančio baltymo aktyvumą, taip atidarant bakterijų lac operoną ir inicijuojant tikslinių genų ekspresiją. Naudojant laktozės operonus kaip baltymų ekspresijos promotorius, reikalingi induktoriai, o IPTG gali veikti kaip laktozės analogas, kad sukeltų galaktozidazės ekspresiją Escherichia coli. Ląstelės negali jo panaudoti ilgalaikei ekspresijai pasiekti. IPTG jungiasi su lac|produktai, sukeliantys konformacinius pokyčius nuo lacO, taip suaktyvindami transkripciją. Šis indukuojamas transkripcijos reguliavimas tapo dažniausiai naudojamu elementu kuriant E. coli ekspresijos sistemos vektorius.
2. Genų ekspresijos reguliavimas:
IPTG vaidina svarbų vaidmenį genų ekspresijos reguliavime. Kaip svarbus eksperimentinis reagentas, jis vaidina svarbų vaidmenį genų ekspresijos reguliavime ir baltymų viršijimo eksperimentuose. Kontroliuojant IPTG pridėjimo laiką ir koncentraciją, galima reguliuoti tikslinio baltymo ekspresiją. Šis reguliavimo poveikis pagrįstas IPTG prisijungimu prie lac|produktai laktozės operonuose, pakeičiantys jų konformaciją, taip paliekant lacO ir toliau aktyvuojant transkripciją. Šis indukuojamas transkripcijos reguliavimo mechanizmas daro IPTG didelę reikšmę tokiose tyrimų srityse kaip genų funkcija, baltymų sąveika ir vaistų atranka.
3. Baltymų kristalizacija:
Baltymų kristalizacijos eksperimentuose IPTG naudojamas kaip induktorius, skatinantis baltymų kristalizaciją. Jo veikimo mechanizmas yra pakeisti baltymų konformaciją, prisijungiant prie hidrofobinių baltymų regionų, taip skatinant baltymų molekulių agregaciją ir kristalizaciją. Šis agregacijos ir kristalizacijos procesas yra grįžtamas, todėl baltymų kristalizaciją galima paskatinti pridedant IPTG, arba baltymų kristalus galima ištirpinti pašalinus IPTG.
Baltymų kristalizacijos eksperimentuose IPTG paprastai pridedama prie baltymų tirpalo, kai galutinė koncentracija yra 1 mM. Dėl šios mažos IPTG koncentracijos galima išvengti per didelės baltymų indukcijos ir taip pasiekti geresnių kristalizacijos efektų. Tuo pačiu metu IPTG taip pat gali tarnauti kaip molekulinis chaperonas, padedantis tinkamai sulankstyti ir agreguoti baltymus ir taip gauti vienodesnius baltymų kristalus.
Reikėtų pažymėti, kad IPTG ne visais atvejais skatina baltymų kristalizaciją. Kai kurie baltymai nėra jautrūs IPTG arba dėl jiems būdingos struktūros ir savybių, kurios netinka kristalizacijai, norint nustatyti optimalias kristalizacijos sąlygas ir metodus, skirtingiems baltymams reikalingas eksperimentinis patvirtinimas ir optimizavimas.
Nepageidaujamos reakcijos
Citotoksiškumas
Toksiškumas prokariotinėms ląstelėms
Nors IPTG dažniausiai naudojamas genų ekspresijai sukelti prokariotinėse ląstelėse, didelės IPTG koncentracijos gali turėti toksinį poveikį prokariotinėms ląstelėms. Tyrimai parodė, kad kai IPTG koncentracija yra per didelė, ji gali sutrikdyti normalius medžiagų apykaitos procesus ląstelėse. Pavyzdžiui, jis gali paveikti ląstelių energijos apykaitą, trukdyti tokiems keliams kaip glikolizė ir trikarboksirūgšties ciklas, dėl to sumažėja tarpląstelinė ATP gamyba ir paveikiamas ląstelių augimas bei proliferacija. Be to, didelės IPTG koncentracijos taip pat gali pažeisti ląstelės membranos vientisumą, padidinti jos pralaidumą, sukelti tarpląstelinių medžiagų nutekėjimą ir leisti kenksmingoms medžiagoms iš ekstraląstelinės aplinkos patekti į ląstelę ir taip sukelti ląstelės mirtį. Eksperimentais nustatyta, kad kai Escherichia coli yra kultivuojama terpėje, kurioje yra didelės IPTG koncentracijos, bakterijų augimo greitis žymiai sulėtėja, o gyvybingų bakterijų skaičius palaipsniui mažėja ilgėjant auginimo laikui. Tai rodo, kad didelės IPTG koncentracijos turi tam tikrą slopinamąjį ir žudantį poveikį Escherichia coli.
Toksiškumas eukariotų ląstelėms
Be prokariotinių ląstelių, IPTG taip pat gali būti toksiškas eukariotų ląstelėms. Yra tam tikrų eukariotinių ir prokariotinių ląstelių struktūros ir funkcijų skirtumų, tačiau IPTG vis tiek gali įvairiais būdais paveikti normalias eukariotinių ląstelių fiziologines funkcijas. Viena vertus, IPTG gali trukdyti signalo perdavimo keliams eukariotinėse ląstelėse. Signalo perdavimas ląstelėse vaidina lemiamą reguliavimo vaidmenį tokiuose procesuose kaip augimas, diferenciacija ir apoptozė. IPTG gali pakeisti signalo perdavimo intensyvumą ir kryptį, sąveikaudamas su tam tikromis signalinėmis molekulėmis ląstelėse, taip paveikdamas normalią fiziologinę ląstelių veiklą.
Toksiškumas eukariotų ląstelėms
Kita vertus, IPTG gali sukelti oksidacinį streso atsaką eukariotinėse ląstelėse. Oksidacinis stresas reiškia intraląstelinės oksidacijos ir antioksidacinio aktyvumo disbalansą, dėl kurio padidėja reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) gamyba. Per didelis ROS kiekis gali atakuoti biomolekules, tokias kaip DNR, baltymai ir lipidai ląstelėje, sukeldami ląstelių pažeidimus ir funkcinius sutrikimus. Tyrimai parodė, kad tam tikromis sąlygomis eukariotinių ląstelių gydymas IPTG žymiai padidina tarpląstelinį ROS lygį, kartu sumažėja ląstelių gyvybingumas ir padidėja apoptozės greitis. Tai rodo, kad IPTG gali sukelti oksidacinį streso atsaką ir toksinį poveikį eukariotų ląstelėms.
Populiarus Žymos: iptg powder cas 367-93-1, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, urmu, parduoti