Proteinazės K milteliai CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. yra viena iš labiausiai patyrusių proteinazės k miltelių cas 39450-01-6 gamintojų ir tiekėjų Kinijoje. Sveiki atvykę į didmeninę prekybą aukštos kokybės proteinazės k milteliais cas 39450-01-6, parduodami čia iš mūsų gamyklos. Galimas geras aptarnavimas ir priimtina kaina.

Proteinazės K milteliaiyra labai efektyvi, nespecifinė serino proteazė, plačiai naudojama molekulinėje biologijoje ir biochemijoje, daugiausia skirta baltymams skaidyti ir užteršusiems baltymams pašalinti iš nukleorūgščių preparatų. Jis yra kilęs iš grybo Engyodontium album (anksčiau Tritirachium album) ir išlaiko savo aktyvumą įvairiuose temperatūrų (20–60 laipsnių) ir pH (4–12) diapazonuose, net kai denatūravimo sąlygomis yra inkubuojamas tirpale, kuriame yra SDS (0,5–1%) arba karbamido (4M).

Fermentas efektyviai skaido įvairius baltymus, įskaitant RNazę ir DNazę, skaidydamas peptidinius ryšius (geriausia hidrolizuodamas alifatinių/aromatinių aminorūgščių karboksilo galą), todėl yra naudojamas nukleazėms pašalinti ekstrahuojant DNR/RNR, siekiant užtikrinti nukleorūgščių vientisumą. Be to, jis dažniausiai naudojamas audinių virškinimui (pvz., parafino -įterptiesiems mėginiams), ląstelių lizės ir proteomikos tyrimams.

Proteinazės K milteliai paprastai tiekiami liofilizuota forma, kuri yra labai stabili (-20 laipsnių ilgalaikiam saugojimui) ir prieš naudojimą turi būti ištirpinta buferyje (pvz., Tris-HCl, EDTA). Jo aktyvumas priklauso nuo Ca²⁺, tačiau kompleksonai, tokie kaip EDTA, tik iš dalies slopina fermentų aktyvumą. Tvarkant reikia vengti savaiminio skilimo ir rekomenduojama inaktyvuoti 65 laipsnių temperatūroje. Dėl stipraus baltymų hidrolizacijos gebėjimo reikia atidžiai apsaugoti, kad būtų išvengta sąlyčio su oda ar gleivinėmis.

Proteinazės k milteliai, taip pat žinomas kaip proteinazė K arba EC 3.4.21.14, yra serino proteazė, išskirta ir išgryninta iš Tritirachium album Limber. Nuo tada, kai ją pirmą kartą izoliavo Wolfgangas Ebelingas ir kt. 1974 m. proteinazė K buvo plačiai naudojama biochemijoje, molekulinėje biologijoje, medicinoje ir pramonėje dėl didelio aktyvumo ir plataus substrato specifiškumo.

DNR ir RNR ekstrahavimo procese pagrindinė proteinazės K funkcija yra skaidyti baltymus, susietus su nukleino rūgštimis, leidžiant DNR arba RNR būti laisvai tirpale, kad vėliau būtų galima ekstrahuoti ir išvalyti. Dėl savo stabilumo ir didelio aktyvumo denatūruojančiuose agentuose, tokiuose kaip karbamidas ir SDS, proteinazė K dažniausiai naudojama plazmidėms arba genomo DNR ir RNR išskirti.

proteinazė K gali slopinti RNRazės aktyvumą ir apsaugoti RNR nuo skilimo.

1. DNR ir RNR ekstrahavimas

 

DNR ekstrahavimas: Proteazė K gali hidrolizuoti histonus, kurie jungiasi su DNR, todėl DNR gali disocijuoti tirpale. Vėliau priemaišos buvo pašalintos įvairiais metodais, tokiais kaip fenolio chloroformo ekstrahavimas, nusodinimas etanoliu ir kt., Ir buvo surinkta išgryninta DNR.
RNR ekstrahavimas: RNR ekstrahavimo proceso metu RNR fermentai paprastai būna aplinkoje, o pačioje mėginių sistemoje taip pat gali būti RNR fermentų, todėl RNR labai jautri skaidymui. Pridedant nedidelį kiekį

2. In situ hibridizacijos technologija

 

In situ hibridizacijos technologija, proteinazė K dažniausiai naudojama išankstiniam hibridizacijos procesui, siekiant suvirškinti baltymus, supančius tikslinę DNR, padidinti zondo prisijungimo prie tikslinės nukleino rūgšties tikimybę ir sustiprinti hibridizacijos signalą. Tačiau reikia pažymėti, kad kai proteinazės K koncentracija yra per didelė, virškinimo laikas per ilgas arba inkubacijos temperatūra yra per aukšta, tai gali pakenkti ląstelės struktūrai, dėl kurios gali išsiskirti audinių pjūviai ir išnykti ląstelių branduoliai, o tai turi įtakos hibridizacijos rezultatams. Todėl praktiškai būtina griežtai kontroliuoti proteinazės K koncentraciją ir gydymo laiką.

3. Viruso inaktyvavimas ir dezinfekavimas

 

Proteazė K dėl savo stipraus proteolitinio aktyvumo gali būti naudojama virusų inaktyvavimui ir dezinfekcijai. Tyrimai parodė, kad gryno vandens ir buitinių nuotekų valymas tam tikra proteinazės K koncentracija gali veiksmingai inaktyvuoti virusus. Proteazė K, kaip virusą inaktyvuojanti dezinfekavimo priemonė, gali sumažinti galimą įprastų oksidacinių cheminių dezinfekantų daromą žalą žmogaus organizmui, o jos gamyba ir transportavimas yra saugus be negrįžtamos aplinkos taršos.

4. Western blotting ir impulsinė elektroforezė

 

Proteazė K taip pat buvo plačiai naudojama ruošiant chromosomų DNR impulsinei elektroforezei, Western blot ir kitiems eksperimentams. Atliekant Western blot eksperimentus, proteinazė K gali būti naudojama ne-specifiniams baltymams pašalinti iš mėginio, taip pagerinant bloto specifiškumą ir jautrumą. Impulsinės elektroforezės eksperimentuose proteinazė K gali skaidyti baltymų priemaišas DNR mėginiuose ir pagerinti elektroforezės efektyvumą.

5. Baltymų aptikimas ir identifikavimas

 

Proteinazės k milteliaitaip pat gali būti naudojamas aptikti ir identifikuoti tam tikrus baltymus. Pavyzdžiui, tiriant užkrečiamąją spongiforminę encefalopatiją (USE), proteinazė K gali būti naudojama baltymams virškinti smegenų audinių mėginiuose ir prionų baltymų buvimui nustatyti nustatant patogeninių prionų atsparumą proteinazei K. Be to, proteinazė K taip pat gali būti naudojama eksperimentams, pvz. lizocimas ir ribonukleazė A).

1. Medicinos sritis

 

Klinikinis naudojimas: Proteazė K turi tam tikrą medicininę vertę medicinoje. Pavyzdžiui, nevirškinimą gydyti skrandžio proteaze, bronchitą – rūgštine proteaze, vaskulitą – elastaze ir kt. Be to, chirurginėms pūlingoms žaizdoms valyti ir pleuros serozinėms sąaugoms gydyti taip pat dažnai naudojami tripsinai, chimotripsinas ir kt.
Virusų aptikimas ir diagnostika: Protease K taip pat gali būti pritaikyta virusų aptikimui ir diagnostikai. Virškinant viruso mėginyje esančius baltymus ir atskleidžiant viruso nukleino rūgštį, patogu atlikti tolesnius nukleino rūgščių tyrimus.

2. Pramonės sektorius

 

Odos pramonė: Protease K naudojama odos pramonėje plaukų šalinimui ir minkštinimui, todėl galima sutaupyti laiko ir pagerinti darbo higienos sąlygas.
Tekstilės pramonė: Proteazė K gali būti naudojama tekstilės pramonėje, pvz., šilko šalinimui.
Maisto pramonė: Proteazė K gali būti naudojama maisto pramonėje mėsos minkštinimui, alkoholio skaidrinimui ir kt.
Skalbimo priemonė: skalbinių ploviklis su fermentais yra naujas ploviklių produktas. Skalbinių ploviklis, kurio sudėtyje yra šarminės proteazės, gali pašalinti kraujo dėmes ir baltymų nešvarumus nuo drabužių. Tačiau naudodami jį būkite atsargūs ir nelieskite odos, kad nepažeistumėte odos paviršiaus esančio baltymo ir nesukeltumėte alerginių reakcijų, tokių kaip bėrimas ir egzema.

Struktūrinės charakteristikos

 

Proteinazės K molekulinė masė yra maždaug 28 900 daltonų (28, 9 kDa), taip pat literatūroje yra 29, 3 kDa. Jo aminorūgščių seka ir trimatė erdvinė struktūra yra labai panaši į serino proteazių šeimos subtilziną, tačiau yra ir keletas unikalių savybių.

Disulfidinių jungčių struktūra: Proteazės K molekulėse yra disulfidinių jungčių, kurios padidina jų stabilumą ir leidžia išlaikyti aktyvumą plačiame pH diapazone ir aukštoje temperatūroje.
Ca ² ⁺ surišimo vietos:Proteinazės k milteliaiyra dvi Ca ² ⁺ surišimo vietos, kurios, nors ir toli nuo aktyvaus centro, yra labai svarbios palaikant fermento katalizinį aktyvumą. Pašalinus Ca ² ⁺ proteazė K praras apie 80 % savo aktyvumo, o vėl įvedus Ca ² ⁺ gali tik iš dalies atkurti jos aktyvumą.
Katalizinė triada: Proteazė K turi katalizinę triadą Asp-His69-Ser224, kuri yra pagrindinė jos hidrolizinio aktyvumo struktūra.

Veikimo mechanizmas

 

Proteazė K pirmiausia gali hidrolizuoti esterinius ir peptidinius ryšius, esančius greta hidrofobinių aminorūgščių, sieros- turinčių aminorūgščių ir aromatinių aminorūgščių C-galo, hidrolizuodama baltymus į trumpus peptidus. Jo veikimo mechanizmas daugiausia apima šiuos veiksmus:

Fermento substrato surišimas: Sumaišius proteazę K su substratu, substratas prisijungia prie aktyviosios fermento vietos, sudarydamas fermento substrato kompleksą.
Katalizinė reakcija: Veikiant aktyviajai vietai, substrato peptidinė jungtis hidrolizuojama, kad susidarytų produktas, atskirtas nuo fermento.
Dėl stipraus proteazės K skaidymo poveikio ji tampa pagrindiniu reagentu įvairiose biocheminėse reakcijose, ypač DNR ir RNR ekstrahavimo procesuose. Proteazė K gali efektyviai skaidyti baltymus, prisijungusius prie nukleino rūgščių, atpalaiduoti nukleino rūgštis ir slopinti nukleazių aktyvumą, sumažindama nukleorūgščių skilimą ekstrahavimo metu.

Proteinazės k milteliai, kaip labai aktyvi ir substratui specifinė serino proteazė, plačiai naudojama biochemijoje, molekulinėje biologijoje, medicinoje ir pramonėje. Jis gali skaidyti baltymus, kurie jungiasi su nukleino rūgštimis ir išskiria nukleino rūgštis; Padidinti zondų galimybę prisijungti prie tikslinių nukleorūgščių in situ hibridizacijos technologija; Naudojamas virusų inaktyvavimui ir dezinfekcijai; Pašalinti baltymų priemaišas Western blot ir impulsinės elektroforezės eksperimentuose; Turi gydomąją vertę medicinos srityje; Naudojamas tokiose pramonės srityse kaip odos apdirbimas, tekstilės pramonė, maisto pramonė ir ploviklių gamyba. Tačiau naudojant proteinazę K reikia atkreipti dėmesį į jos laikymo būdą ir naudojimo sąlygas, kad būtų užtikrintas jos stabilumas ir aktyvumas.

Proteinazė K yra plataus{0}}spektro serino proteazė, plačiai naudojama molekulinės biologijos, biochemijos ir medicinos tyrimų srityse dėl savo unikalių fermentinių savybių ir stabilumo. Proteinazės K milteliai, kaip šaldyti-džiovinti milteliai, atlieka lemiamą vaidmenį atliekant tokius eksperimentus kaip nukleino rūgščių ekstrahavimas, baltymų virškinimas ir audinių homogenizavimas. Tačiau naudojant bet kokį biologinį reagentą gali kilti pavojus, o jo nepageidaujamos reakcijos gali būti susijusios su operatorių sveikata ir eksperimentinės aplinkos sauga.

Populiarus Žymos: proteinazės k milteliai cas 39450-01-6, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, urmu, parduoti