Tiazolilo mėlynasis CAS 298-93-1

„Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd.“ yra viena iš labiausiai patyrusių tiazolilo mėlynojo cas 298-93-1 gamintojų ir tiekėjų Kinijoje. Sveiki atvykę į didmeninę prekybą aukštos kokybės tiazolilo mėlynuoju cas 298-93-1, parduodamu čia iš mūsų gamyklos. Galimas geras aptarnavimas ir priimtina kaina.

Tiazolilo mėlyna, geriau žinomas kaip MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio bromidas), turi įspūdingą dvilypumą – jis yra ir gyvybiškai svarbus ląstelių biologijos įrankis, ir chameleoniškas cheminis keistumas. Šie geltoni kristaliniai milteliai gyvose ląstelėse patiria stulbinančią metamorfozę: mitochondrijų reduktazės suskaido jo tetrazolio žiedą ir paverčia jį netirpiomis purpurinėmis formazano nuosėdomis – tokia vizualiai įspūdinga reakcija, kad tapo auksiniu ląstelių gyvybingumo matavimo etalonu. Tačiau už laboratorijos stendo MTT atskleidžia daugiau ezoterinio elgesio; jo kristalinė struktūra mikroskopuojant formuoja savotiškus „eglutės“ raštus, o redoksinės savybės leidžia dalyvauti egzotiškose fotocheminėse reakcijose, kai yra veikiamas tam tikro ilgio šviesos. Įdomu tai, kad junginys pasižymi retu reiškiniu, vadinamu „metachromazija“ – skirtingomis spalvomis, priklausomai nuo koncentracijos ir molekulinės aplinkos. Naujausi tyrimai atskleidė netikėtą jo, kaip silpno tam tikrų kvėpavimo grandinės fermentų inhibitoriaus, vaidmenį, o tai rodo, kad šis visur esantis tyrimo reagentas galėjo subtiliai paveikti pačius medžiagų apykaitos procesus, kuriuos mokslininkai naudoja tyrinėdami. Ištirpinti organiniuose tirpikliuose, MTT tirpalai pasižymi neįprastu fluorescencijos gesinimo efektu, kuris suglumino fizikinius chemikus, o tai rodo, kad sudėtingos tarpmolekulinės sąveikos vis dar laukia išsamaus paaiškinimo.

Tiazolilo mėlynaCheminis pavadinimas yra 3-(4,5-dimetil-2-tiazolas)-2,5-difeniltetrazolio bromidas, sutrumpintai vadinamas MTT, kuris yra svarbus organinis junginys. Nuo tada, kai 1983 m. Mosmanas pirmą kartą pranešė apie MTT dažymą ląstelių augimui ir išgyvenimui nustatyti, MTT buvo plačiai taikomas tokiose srityse kaip gyvosios gamtos mokslai, medicinos tyrimai ir vaistų kūrimas. Toliau pateikiamas išsamus jo paskirties paaiškinimas:

Taikymas ląstelių biologijos tyrimuose

 

MTT yra vienas iš klasikinių ląstelių proliferacijos nustatymo metodų. Ląstelių kultivavimo metu dehidrogenazės, tokios kaip sukcinato dehidrogenazė gyvų ląstelių mitochondrijose, gali redukuoti egzogeninį MTT iki netirpios mėlynai violetinės spalvos kristalinio formazano, kuris nusėda ląstelėje. Negyvoms ląstelėms trūksta šio redukcinio gebėjimo, todėl negamina formazano. Ištirpinant formazaną ląstelėse ir išmatuojant jo šviesos sugerties vertę esant tam tikriems bangos ilgiams (pvz., 490 nm arba 562 nm), naudojant fermentinį imunosorbentinį tyrimą (ELISA), gyvų ląstelių skaičius gali būti netiesiogiai atspindėtas. Tam tikrame ląstelių skaičiaus diapazone susidarančių MTT kristalų kiekis yra proporcingas ląstelių skaičiui, todėl ląstelių proliferaciją galima nustatyti pagal išmatuotą absorbcijos vertę (OD vertę).

Taikymas ląstelių biologijos tyrimuose

 

MTT taip pat gali būti naudojamas nustatant vaistų ar kitų gydymo metodų (pvz., spinduliuotės) toksiškumą auginamoms ląstelėms in vitro. Lyginant gydomosios ir kontrolinės grupės OD reikšmes, galima įvertinti vaistų ar gydymo metodų poveikį ląstelių aktyvumui. Kuo didesnė OD reikšmė, tuo stipresnis ląstelės aktyvumas; Priešingai, tai rodo, kad kuo silpnesnis ląstelių aktyvumas arba didesnis ląstelių toksiškumas. Šis metodas plačiai taikomas narkotikų atrankoje, toksikologiniuose tyrimuose ir kitose srityse. Nors MTT daugiausia naudojamas ląstelių proliferacijai ir citotoksiškumui matuoti, kai kuriais atvejais jis taip pat gali būti naudojamas siekiant padėti tirti ląstelių apoptozę. Ląstelių apoptozės proceso metu kinta fermentų aktyvumas ląstelės viduje, o tai gali turėti įtakos MTT redukciniam gebėjimui. Palyginus OD verčių skirtumą tarp apoptotinių ląstelių ir normalių ląstelių, galima preliminariai nustatyti ląstelių apoptozės atsiradimą. Tačiau reikia pažymėti, kad MTT nėra specializuotas ląstelių apoptozės nustatymo metodas, todėl jo rezultatus reikia visapusiškai išanalizuoti kartu su kitais apoptozės nustatymo metodais.

Taikymas kuriant vaistus

 

Vaistų kūrimo procese MTT tyrimas yra dažniausiai naudojamas didelio našumo{0}}vaistų atrankos metodas. Inkubuojant tiriamąjį vaistą kartu su ląstelėmis ir naudojant MTT testą ląstelių aktyvumo pokyčiams matuoti, galima greitai patikrinti galimas aktyvias vaisto molekules. Šis metodas turi lengvo veikimo, patikimų rezultatų ir didelio pralaidumo privalumus ir turi svarbią taikymo vertę ankstyvoje vaistų kūrimo stadijoje. MTT tyrimas taip pat gali būti naudojamas tiriant vaistų veikimo mechanizmą. Lyginant ląstelių aktyvumo pokyčius skirtingomis gydymo vaistais sąlygomis, galima preliminariai nustatyti vaistų įtaką tokiems procesams kaip ląstelių proliferacija ir apoptozė. Derinant kitus molekulinės biologijos metodus, tokius kaip Western blot ir srauto citometrija, galima dar labiau atskleisti vaistų taikinius ir signalizacijos kelius. Vertinant vaistų saugumą, MTT tyrimas gali būti naudojamas toksiniam vaistų poveikiui ląstelėms įvertinti. Išmatavus ląstelių OD vertės pokyčius po gydymo vaistais, galima nustatyti, ar vaistas turi citotoksiškumą ir toksiškumo stiprumą. Tai labai svarbu vadovaujant ikiklinikiniams tyrimams ir klinikiniam vaistų taikymui.

MTT taikymas kitose srityse

 

Imunologiniuose tyrimuose MTT tyrimas gali būti naudojamas limfocitų proliferacijos gebėjimui nustatyti. Inkubuojant limfocitus kartu su antigenais arba imunostimuliatoriais ir matuojant ląstelių aktyvumo pokyčius naudojant MTT testą, galima įvertinti limfocitų imuninio atsako gebėjimą. Šis metodas plačiai taikomas vakcinų kūrimo, imunoterapijos ir kitose srityse. Onkologiniuose tyrimuose MTT tyrimas gali būti naudojamas naviko ląstelių proliferacijos aktyvumui ir jautrumui vaistams nustatyti. Lyginant navikinių ląstelių OD verčių pokyčius skirtingomis gydymo vaistais sąlygomis, galima patikrinti naviko ląsteles slopinančio poveikio vaistų molekules ir įvertinti jų priešnavikinį poveikį. Tai labai svarbu vadovaujant klinikiniam navikų gydymui. Aplinkos toksikologijos tyrimuose MTT tyrimas gali būti naudojamas aplinkos teršalų toksiniam poveikiui ląstelėms įvertinti. Kartu inkubuojant ląsteles su skirtingomis teršalų koncentracijomis ir matuojant ląstelių aktyvumo pokyčius naudojant MTT testą, galima nustatyti teršalų toksiškumą ir veikimo mechanizmą. Tai labai svarbu vertinant aplinkos teršalų keliamą ekologinę riziką ir formuojant aplinkos apsaugos politiką. 

Eksperimentiniai žingsniaitiazolilo mėlynametodas:

1: tripsinas virškina logaritminės fazės ląsteles, centrifuguoja ir surenka jas pasibaigus, kad susidarytų ląstelių suspensija, ir pakoreguoja jo koncentraciją iki 5–10 pagal ląstelių skaičių × 104/ml. Pradedantiesiems būtina, kad ląstelės pasiektų 5-10 × 104/ml, dažnai nežino, nuo ko pradėti. Esu čia tam, kad pateikčiau jums paprastą būdą, kaip iš pradžių nustatyti langelių skaičių.

Kaip pavyzdį paimkite 25 cm2, dažniausiai naudojamą ląstelių kultūrai:

1) Ląstelių tankis yra apie 80% ~ 90% (toliau pateiktame paveikslėlyje parodyta apytikslė ląstelių būklė esant 80% ~ 90% tankiui). Po virškinimo ir centrifugavimo pašalinkite supernatantą ir įpilkite 3 ml terpės, kad sumaišytumėte.

2) Paimkite naują 15 ml sterilų centrifugos mėgintuvėlį (kitam 96 šulinėlių plokštelės inokuliacijos etapui) ir užpildykite jį maždaug 9 ml terpės.

3) Paimkite 1 ml iš 3 ml ląstelių suspensijos, paruoštos pirmame žingsnyje, įpilkite į viršutinį mėgintuvėlį ir, sumaišę, suskaičiuokite ląsteles. Šiuo metu jis paprastai yra 5–10 ar mažiau × 104/ml, o tai atitinka 5–10 ląstelių vienoje ląstelėje 4 ląstelių skaičiavimo lentos langeliuose (žr. paveikslėlį toliau); Jei koncentracijos nepakanka, pagal skaičiavimo rezultatą įpilama ląstelių suspensijos ir kiekvienas lašas apskaičiuojamas kaip 50 ul.

4) Ląstelių skaičius turėtų būti koreguojamas atsižvelgiant į skirtingus eksperimento tikslus. Pavyzdžiui, atliekant bendrą ląstelių proliferacijos eksperimentą, galima naudoti 2000 ląstelių vienoje duobutėje (atitinka ląstelių suspensijos tankį 2 × 104/ml), nuo 5000 iki 10000 ląstelių vienoje duobutėje (atitinka ląstelių suspensijos tankį 5 × 104/ml). Be to, ląstelių skaičius taip pat turėtų būti nustatomas pagal jų savybes, pavyzdžiui, augimo greitį. Pavyzdžiui, greičiau augančių ląstelių tankis gali būti kiek mažesnis.

2. Paruošę ląstelių suspensiją, ją švelniai išmaišykite ir į kiekvieną skylutę įpilkite po 100 ul, kad tiriamų ląstelių tankis būtų 5000-10000/skylė (kraštinė anga užpildyta steriliu PBS).

L Pastaba: Kadangi sumaišius ląstelės ir toliau nusistovės, būtina maišyti pakartotinai inokuliacijos proceso metu, pvz., maišyti kartą per šešias skylutes, kad būtų užtikrinta, jog inokuliacijos ląstelių tankis tarp skylių būtų visiškai vienodas, o tai labai svarbu MTT rezultatams.

3. Įdėkite inokuliuotą ląstelių kultūros plokštelę į inkubatorių kultivavimui, kol vienas ląstelių sluoksnis bus padengtas skylės dugnu (96 skylių plokščia plokštelė), ir pridėkite vaistą su koncentracijos gradientu. Iš esmės vaistą galima dėti po to, kai ląstelė yra pritvirtinta prie sienos, arba dvi valandas, arba pusę dienos, tačiau dažnai vaisto pridedame praėjusios dienos popietę ir kitą rytą. Paprastai nustatomi 5–7 gradientai, 100 ul vienai skylei ir 3–5 kelios skylės. Rekomenduojama nustatyti 6, kitaip sunku atspindėti realią situaciją. Šis paveikslas gali būti naudojamas kaip 96 skylių plokštės atskaitos žingsnis.

L Dozuodami kai kurie žmonės tiesiogiai prideda vaistus į 96 šulinėlių plokšteles skirtingais tūriais, kad susidarytų koncentracijos gradientas. Bet manau, kad EP mėgintuvėlyje turėtume pabandyti sumaišyti skirtingų koncentracijų vaistus, tada pašalinti kultūros supernatantą iš 96 šulinėlių plokštelės (kurią galima išsiurbti iškrovimo pistoletu) ir įpilti 100 ul kultūrinės terpės su skirtingos koncentracijos vaistais, kurie gali užtikrinti vaisto koncentracijos tikslumą. Be to, reikia atkreipti dėmesį į tai, kad jei naudojamas šis metodas, prieš įdėdami vaistą, nečiulpkite viso 96 šulinėlių plokštelės kultūros tirpalo. Norėdami išvengti ląstelių mirties dėl 96 šulinėlių plokštelės išdžiūvimo, mėginius turėtumėte pridėti iškart po to, kai išsiurbėte dalį jų.

Inkubuokite su 4,5% CO2 37 laipsnių temperatūroje 16-48 valandas ir stebėkite vaisto poveikį apverstu mikroskopu. Toliau pateiktame paveikslėlyje parodytas tipiškas vaisto citotoksiškumo gradientas.

4. Į kiekvieną duobutę įpilkite 10 ul MTT tirpalo (5mg/ml, ty . 0.5% MTT) ir toliau kultivuokite 4 valandas. Jei vaistas gali reaguoti sutiazolilo mėlynakultūrinį tirpalą po centrifugavimo galima išmesti, o kultūrinį tirpalą, kuriame yra MTT, galima pridėti po to, kai jis 2–3 kartus plaunamas PBS.

5. Sustabdykite kultūrą ir paruoškite ištirpinimui bei kristalizacijai.

Tiazolilo mėlyna, kurio kiniškas pavadinimas yra Methyl Blue, yra svarbus organinis junginys, plačiai naudojamas medicinoje, biologijoje ir chemijoje. medicinoje jis dažnai naudojamas apsinuodijimui nitritais, cianidu ir kt. gydyti, taip pat naudojamas kai kurių ligų diagnostikai ir pagalbiniam gydymui; Biologiniuose tyrimuose jis gali būti naudojamas kaip dažymo priemonė ląstelėms ar audiniams žymėti. Tačiau, kaip ir daugelis kitų vaistų, metileno mėlynasis taip pat gali turėti šalutinį poveikį vartojant:

Šalutinis poveikis virškinimo sistemai

Pykinimas ir vėmimas yra vienas iš dažniausių metileno mėlynojo šalutinių poveikių virškinimo sistemai. Į organizmą patekęs metileno mėlynasis gali stimuliuoti virškinimo trakto gleivinę, sunkiais atvejais sukelti pykinimą ir net vėmimą. Šis simptomas ryškesnis, kai į veną leidžiama per greitai arba per didelė dozė. Pavyzdžiui, kai kuriais klinikiniais atvejais pacientai gali jausti didelį pykinimą ir vėmimą netrukus po greitos intraveninės metileno mėlynojo injekcijos, o tai turi įtakos jų patogumui ir gydymo patirčiai. Kai kuriems pacientams, pavartojus metileno mėlynojo, gali pasireikšti pilvo skausmas, o skausmo laipsnis gali skirtis priklausomai nuo individualių skirtumų – nuo ​​lengvo diskomforto iki stipresnio skausmo.

Tuo pačiu metu jį gali lydėti viduriavimas, kuris gali atsirasti dėl metileno mėlynojo trukdžių žarnyno peristaltikai ir virškinimo funkcijai, dėl kurio atsiranda nenormalus žarnyno judėjimas ir virškinimo skysčių sekrecijos pokyčiai. Ilgalaikis ar dažnas pilvo skausmas ir viduriavimas gali ne tik paveikti paciento ir fizinės sveikatos sutrikimus, bet ir kitas maistines medžiagas.

Šlapimo sistemos šalutinis poveikis

Panaudojus metileno mėlyną, šlapimo spalva pasidarys mėlyna, kurią sukelia metileno mėlynojo ir jo metabolitų išskyrimas į šlapimą per inkstus. Apskritai šis šlapimo spalvos pokytis yra laikinas ir neturės rimtos įtakos fizinei sveikatai. Tačiau kai kuriais ypatingais atvejais, pavyzdžiui, sergant šlapimo sistemos ligomis, šlapimo spalvos pokyčiai gali trukdyti diagnozuoti ligą, todėl gydytojai turi atlikti visapusišką analizę, pagrįstą kitais tyrimo rodikliais. Šlapinimosi metu kai kurie pacientai gali jausti perštėjimą šlaplės angoje.

 

Taip gali būti dėl stimuliuojančio metileno mėlynojo poveikio šlaplės gleivinei, ypač kai šlapimo koncentracija didelė arba šlapinimosi metu trinama šlaplės gleivinė, perštėjimo pojūtis bus ryškesnis. Šis simptomas gali sukelti tam tikrą diskomfortą pacientams ir paveikti jų kasdienį gyvenimą.

Neurologinis šalutinis poveikis

Galvos svaigimas ir galvos skausmas yra dažnas neurologinis metileno mėlynojo šalutinis poveikis. Panaudoję metileno mėlyną, pacientai gali jausti galvos svaigimą ir dezorientaciją arba jausti diskomfortą, pvz., galvos patinimą ir skausmą. Šis simptomas gali paveikti paciento dėmesį ir mąstymo gebėjimus bei sumažinti darbo ir gyvenimo efektyvumą. Galvos svaigimas ir galvos skausmas gali būti susiję su metileno mėlynojo poveikiu smegenų kraujagyslėms ir nervams, todėl specifinį mechanizmą dar reikia ištirti. Retais atvejais metileno mėlynasis gali sukelti sąmonės sutrikimus, tokius kaip mieguistumas, koma ir kt.

Paprastai taip yra dėl pernelyg didelio metileno mėlynojo vartojimo arba pacientų per didelio jautrumo vaistui, dėl ko stipriai slopinama centrinė nervų sistema. Sąmonės sutrikimai yra rimtas šalutinis poveikis, galintis kelti pavojų paciento gyvybei ir reikalauti neatidėliotino gydymo.

1. Kam naudojamas tiazolilmėlynasis tetrazolio bromidas?

Tiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) gali būti naudojamas ląstelių proliferacijai matuoti. MTT gamina gelsvą tirpalą, kuris gyvų ląstelių mitochondrijų dehidrogenazėmis paverčiamas tamsiai mėlynu, vandenyje netirpiu MTT formazanu.

2. Ar saugu laikyti Tiazolyl Blue?

Temperatūros sąlygos: sandariai uždarykite miltelius ir laikykite šaldytuve -20 laipsnių temperatūroje, kad būtų galima laikyti užšalus, o tai gali veiksmingai pailginti galiojimo laiką (paprastai 1–2 metus); trumpalaikiam laikymui (per 1 mėn.), laikinai galima laikyti 4 laipsnių šaldymo sąlygomis.

Atsparūs šviesai-ir drėgmei-reikalavimai: MTT milteliai yra šviesai-jautri ir turi būti laikomi ruduose reagentų buteliuose arba permatomuose buteliukuose, apvyniotuose alavo folija. Tuo tarpu reikia pridėti džiovinimo priemonių (pvz., silikagelio), kad milteliai nesugertų drėgmės ir nesuliptų.

3.Ar pasikeis Tiazolyl Blue spalva?

Kai tirpale atsiranda mėlynos violetinės nuosėdos arba tamsėja spalva, tai reiškia, kad jis buvo oksiduotas ir jo toliau naudoti negalima.
Nelaikykite tirpalo kambario temperatūros arba šviesioje aplinkoje, nes jis gali greitai sugesti.

Populiarus Žymos: tiazolilmėlynas cas 298-93-1, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, urmu, parduoti