Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. yra viena iš labiausiai patyrusių nikotinamido ribosido injekcijų gamintojų ir tiekėjų Kinijoje. Sveiki atvykę į mūsų gamykloje parduodamą didmeninę aukštos kokybės nikotinamido ribosido injekciją. Galimas geras aptarnavimas ir priimtina kaina.
Nikotinamido ribosido injekcijayra formulė, kuri tiesiogiai švirkščia nikotinamido ribosidą (NR) į organizmą, siekiant greitai padidinti NR koncentraciją kraujyje ir audiniuose, taip padidinant nikotinamido adenino dinukleotido (NAD⁺) kiekį ląstelėse. Tai vitamino B3 (niacino) darinys ir NAD ⁺ pirmtakas, kurį galima papildyti per burną arba injekcijomis. Jo injekcinė forma yra ištirpinti NR fiziologiniame fiziologiniame tirpale arba specializuotuose tirpikliuose ir švirkšti į veną (IV) arba į raumenis (IM), kad būtų išvengta virškinimo trakto absorbcijos barjero ir būtų pasiektas efektyvesnis biologinis prieinamumas.
Tuo pačiu metu mūsų įmonė tiekia ne tik grynus miltelius, bet ir tabletes bei injekcijas. Jei reikia, nedvejodami susisiekite su mumis bet kuriuo metu.
Mūsų gaminiai
 |
 |
 |
 |
Nikotinamido ribosido chlorido COA
Nikotinamido ribosido injekcijos, pagrįstos Archaea žinduolių hibridiniu fermentu, kūrimas
Nikotinamido ribosidas (NR), kaip pagrindinis NAD ⁺ (nikotinamido adenino dinukleotido) pirmtakas, tapo karšta tema biomedicinos tyrimuose dėl savo potencialo stabdyti -senėjimą, pagerinti medžiagų apykaitą ir apsaugoti nuo neuronų. Tačiau peroralinį NR biologinį prieinamumą riboja virškinimo trakto absorbcijos efektyvumas ir pirmojo praėjimo metabolizmas, o tradicinės injekcinės formulės susiduria su tokiomis problemomis kaip prastas stabilumas ir trumpas pusinės -pusėjimo laikas. Pastaraisiais metais sintetinės biologijos technologijos pasiekimai suteikė naujų idėjų, kaip išspręsti šią problemą: kuriant archeologinę žinduolių NR tiekimo sistemą, kuriant ir kuriant veiksmingus sintetinius NR fermentus ir kuriant bei kuriant tinkamą sintetinę NR tiekimo sistemą. naujos kartosNikotinamido ribosido injekcijasprendimus.
Mokslinis pagrindas: Archaea ir žinduolių fermentų papildomumas
Nepaprastas archeologinių fermentų prisitaikymas prie aplinkos
Archaea yra prokariotinio organizmo tipas, gyvenantis ekstremaliose aplinkose, tokiose kaip aukšta temperatūra, didelė druska ir stipri rūgštis. Jo fermentų sistema pasižymi unikaliu stabilumu ir kataliziniu efektyvumu. Pavyzdžiui:
Hipertermofilinių archėjų (tokių kaip Pyrococcus furiosus) NR kinazė (NRK) išlieka aktyvi 80 laipsnių kampu ir jos afinitetas substratui NR yra daugiau nei 10 kartų didesnis nei žinduolių NRK.
Druską tolerantiškų archėjų, tokių kaip Halobacterium salinarum, NMN adenoziltransferazė (NMNAT) gali katalizuoti NMN pavertimą NAD ⁺ esant dideliam druskos kiekiui ir nėra lengvai skaidoma proteazėmis žinduolių serume.
Tikslus žinduolių fermentų reguliavimas
Žinduolių fermentų sistema turi griežtą audinių specifiškumą ir gebėjimą reguliuoti medžiagų apykaitą:
Žmogaus NRK1/2: NRK1 yra labai išreikštas kepenyse ir griaučių raumenyse, atsakingas už pradinį jo fosforilinimą.Nikotinamido ribosido injekcija; NRK2 daugiausia ekspresuojamas smegenyse ir dalyvauja neuronų NAD⁺ sintezėje.
SIRT1-3 deacetilazė: ji reguliuoja energijos apykaitą, DNR atstatymą ir uždegiminį atsaką, jausdama NAD⁺, sudarydama neigiamą grįžtamojo ryšio reguliavimo kilpą.
Heterozigotinių fermentų projektavimo logika
Derinant archeologinių fermentų stabilumą / katalizinį efektyvumą su žinduolių fermentų reguliavimo specifiškumu, galima sukurti „dviejų funkcijų“ hibridinį fermentą:
Struktūrinio domeno suliejimas: Pavyzdžiui, P. furiosus NRK katalizinis domenas yra sulietas su žmogaus NRK1 membranos lokalizacijos signalo peptidu, kad būtų pasiektas greitas NR fosforilinimas šalia ląstelės membranos.
Kintamos konformacijos reguliavimas: žinduolių SIRT1 NAD ⁺ surišimo domeno įvedimas, siekiant dinamiškai reguliuoti heterozigotinių fermentų aktyvumą intraląsteliniu NAD ⁺ lygiu, išvengiant per didelio NR vartojimo.
Techninis kelias: nuo fermentų projektavimo iki injekcijų kūrimo
Racionalus heterozigotinių fermentų projektavimas
Tikslinio fermento pasirinkimas
Pagrindiniai fermentai: NRK (katalizuoja NR → NMN) ir NMNAT (katalizuoja NMN → NAD ⁺), nes jie tiesiogiai lemia NR konversijos efektyvumą.
Pagalbiniai fermentai, tokie kaip NAMPT (nikotinamido fosforiboziltransferazė), naudojami nikotinamidui (NAM) atgauti ir NMN sintezuoti, sudarant NR perdirbimo sistemą.
Domeno padalijimas ir rekombinacija
NRK sintazės pavyzdys:
Archaea skyrius: Klonuokite NRK geną iš P. furiosus genomo, išsaugodami jo ATP surišimo domeną ir katalizinę triadą (pvz., K123-D245-E278).
Žinduolių dalis: ištraukite žmogaus NRK1 N-galinį transmembraninį domeną (TM, 1-50 aa) ir C-galinį PEST degradacijos signalą (400–450 aa), kad kontroliuotumėte fermento membranos lokalizaciją ir pusinės eliminacijos laiką.
Lankstus linkerio peptidas: įterpiamasis (GGGGS) ∝ linkeris, siekiant sumažinti sterinius kliūtis tarp struktūrinių domenų.
Nukreiptas evoliucinis optimizavimas
Naudojant į klaidas linkusią PGR ir fluorescencijos aktyvuotą ląstelių rūšiavimą (FACS), buvo patikrinti šie mutantai:
Padidintas stabilumas aukštoje{0}}temperatūroje: įvedus T215I mutaciją į P. furiosus NRK katalizinę kišenę, fermento pusinės eliminacijos laikas pailgėjo nuo 2 valandų iki 12 valandų 37 laipsnių temperatūroje.
Substrato specifiškumo išplėtimas: žmogaus NRK2 mutacijos F198L įvedimas į heterozigotinį fermentą, leidžiantis jam vienu metu panaudoti NR ir nikotinato ribozę (NaR) kaip substratus.
Heterozigotinių fermentų ekspresija ir gryninimas
Išraiškos sistemos pasirinkimas
Pichia pastoris sistema: tinka sekrecinei ekspresijai, gali išvengti endotoksinų užteršimo, tačiau reikia optimizuoti metanolio indukcijos sąlygas, kad būtų išvengta skilimo heterozigotiniais fermentais.
Žinduolių ląstelių sistema (HEK293): ji gali pasiekti teisingą glikozilinimo modifikaciją ir pagerinti fermentų stabilumą serume, tačiau kaina yra gana didelė.
Valymo strategija
Afininė chromatografija: pridėkite His ₆ žymą prie heterozigotinio fermento C-galo ir išvalykite Ni NTA derva.
Jonų mainų chromatografija: tolesnis skirtingų krūvio variantų atskyrimas naudojant Mono Q kolonėlę.
Dydžio išskyrimo chromatografija (SEC): Pašalinkite oligomerus, kad gautumėte monodispersinius heterozigotinius fermentus.
Hibridinių fermentų preparatų kūrimas
Stabilumo didinimas
Cheminis modifikavimas: polietilenglikolis (PEG) naudojamas modifikuoti lizino likučius heterozigotinio fermento paviršiuje, pailginant jo pusinės -periodį serume (nuo 2 valandų iki 24 valandų).
Nano kapsuliavimas: hibridinių fermentų įkėlimas į liposomas arba polimero nanodaleles, siekiant apsaugoti jas nuo proteazės skilimo.
Įpurškimo dizainas
Liofilizuotų miltelių įpurškimas: sumaišykite heterozigotinius fermentus su šaldymo -džiūvimo apsaugančiomis medžiagomis, tokiomis kaip sacharozė ir manitolis, išdžiovinkite šalčiu -80 laipsnių temperatūroje ir ištirpinkite PBS, kurio pH yra 7,4, kad būtų užtikrintas optimalus stabilumas.
Ilgai veikiantis mikrosferos preparatas: PLGA (poli (pieno rūgšties glikolio rūgšties) kopolimeras) naudojamas heterozigotiniam fermentui įkapsuliuoti, užtikrinant ilgalaikį atpalaidavimą 14 dienų.
In vitro ir in vivo patvirtinimas
In vitro aktyvumo tyrimai
Fermento kinetikos parametrai: heterozigotinio fermento Km (0,12 mM) ir Vmax (150 nmol/min/mg)Nikotinamido ribosido injekcijabuvo nustatyti, kurie buvo žymiai geresni nei laukinio -tipo P. furiosus NRK (Km=0.5 mM, Vmax=80 nmol/min/mg).
Eksperimentas su ląstelėmis: HepG2 kepenų ląstelėse NAD ⁺ lygis heterozigotinio fermento gydymo grupėje buvo tris kartus didesnis nei grupėje, gydytoje vien NR, ir nesukėlė citotoksiškumo (LDH išsiskyrimo greitis).<5%).
Gyvūnų modelio patvirtinimas
Senstančios pelės modelis: 18 mėnesių amžiaus C57BL/6 pelėms 8 savaites buvo švirkščiamas į pilvaplėvės ertmę heterozigotinis fermentas (5 mg/kg per savaitę). Po 8 savaičių kepenų NAD⁺ lygis padidėjo 40%, o mitochondrijų kvėpavimo grandinės komplekso I aktyvumas atsigavo iki jaunų pelių lygio.
Mitochondrijų miopatijos modelis: suleidus heterozigotinių fermentų Sco2 išmuštoms pelėms, raumenų jėga padidėjo 25%, o pratimų ištvermė pailgėjo 30%.
Pagrindiniai iššūkiai ir sprendimai
Imunogeniškumo problemos
Iššūkis: Heterologinės archeologinių fermentų sekos gali sukelti šeimininko imuninį atsaką (pvz., vaistams{0}}atsparių antikūnų (ADA) gamybą).
Humanizavimo modifikavimas: kompiuterinio -projektavimo (Rosetta) naudojimas pakeičiant archaea fermentų paviršiaus aminorūgštis aukšto -dažnio žmogaus liekanomis (pvz., P. furiosus NRK L102 pakeitimas žmogaus NRK1 V102).
Imuninės tolerancijos indukcija: prieš pirmąją injekciją mažos -dozės heterozigotinis fermentas (0,1 mg/kg) buvo iš anksto stimuliuojamas, kad paskatintų reguliuojančių T ląstelių (Treg) išsiplėtimą.
Fermento stabilumas ir pusinės eliminacijos laikas
Iššūkis: žinduolių serume yra daug proteazių, tokių kaip neutrofilų elastazė, kurios gali skaidyti heterozigotinius fermentus.
Kryptinė mutacija: prolino (P) įvedimas į heterozigotinio fermento (pvz., žmogaus NRK1 K150-R151) proteazės skilimo vietą, siekiant blokuoti skilimą.
Sulietų baltymų strategija: heterozigotinio fermento suliejimas su serumo albuminą rišančiu domenu (pvz., HSA III domenu), naudojant natūralų albumino stabilumą pusinės -skilimo trukmės pailginimui.
Metabolizmo reguliavimo disbalansas
Iššūkis: Per didelis NR papildymas gali sukelti NAD⁺/NADH santykio disbalansą ir sukelti oksidacinį stresą.
Grįžtamojo ryšio slopinimo dizainas: Įveskite žinduolių SIRT3 NAD ⁺ surišimo domeną į heterozigotinį fermentą ir automatiškai sumažinkite fermento aktyvumą, kai NAD ⁺ lygis yra per didelis.
Kombinuotas vartojimas: naudojamas kartu su antioksidantais (pvz., N-acetilcisteinu, NAC), siekiant palaikyti ląstelių redokso pusiausvyrą.
Didelio masto gamybos kliūtys
Iššūkis: Archealinių fermentų ekspresijos lygis yra žemas (paprastai<10 mg/L), making it difficult to meet clinical needs.
Kodonų optimizavimas: pakeiskite retus archeologinių genų kodonus didelio -dažnio mielių / žinduolių kodonais (pvz., AGG pakeitimas CGA).
Didelio tankio fermentacija: naudojant perfuzinį bioreaktorių (pvz., Xcellerex XDR-500), siekiant padidinti heterozigotinių fermentų gamybą iki daugiau nei 50 mg/l.
Ateities perspektyvos
Tikslios medicinos programos
Gydymas pagal genotipą: nustatant paciento NRK1/2 geno polimorfizmą (pvz., rs12792273), pritaikius heterozigotinių fermentų dozę ir injekcijų dažnį.
Specifinis{0}}audinių pristatymas: naudojant antikūnų fermentų konjugatų (AEC) technologiją, tikslingas heterozigotinių fermentų tiekimas į kepenis (ASGPR antikūnas) arba smegenis (TfR antikūnas).
Daugelio fermentų bendradarbiavimo sistema
„NR sintezės konversijos atkūrimo“ visos grandinės hibridinių fermentų sistemos sukūrimas:
NR sintazė: Methanococcus jannaschii archėjos NR sintazės suliejimas su žmogaus NAMPT, kad būtų pasiekta tiesioginė konversija iš NAM į NR.
NAD ⁺ jutiklis: įvedamas šviesa valdomas jungiklis (pvz., šviesai jautrus jonų kanalas), skirtas dinamiškai reguliuoti heterozigotinių fermentų aktyvumą apšvitinant mėlyna šviesa.
Klinikinis konversijos kelias
I fazės tyrimas: vienkartinės dozės didinimas (0,1-10 mg/kg) sveikiems savanoriams, stebint farmakokinetiką (PK) ir farmakodinamiką (PD).
II fazės tyrimas: įvertinkite heterozigotinių fermentų injekcijos gerinimo poveikį pacientų, sergančių mitochondrijų ligomis, pratimų tolerancijai ir raumenų jėgai.
III fazės bandymas: daugiacentris, atsitiktinių imčių, dvigubai aklas{0}}bandymas, skirtas ilgalaikiam-saugumui ir veiksmingumui patikrinti.
Dažnai užduodami klausimai
Ar tai „vienvietis“ ar „daugelis“? – Mažiausiai trys kristalų „klonai“
+
-
Nikotinamido ribozilo chloridas (NRCl) yra įvairių kristalų formų ir turi įvairių fizikinių ir cheminių savybių. Iki šiol buvo pranešta ir apibūdinta mažiausiai trys kristalų formos:
A ir B kristalinės formos: abi yra tikri bevandenių medžiagų polimorfai.
C kristalinė forma: tai pseudopolimorfinė metanolio solvato forma.
Stabilumo reitingas: buvo nustatytas fizinio stabilumo ryšys, tarp kurių B kristalų forma buvo patvirtinta kaip stabiliausia kristalų forma, o jos kristalų struktūra buvo nustatyta monokristalų rentgeno spindulių difrakcijos analize. Tai reiškia, kad skirtingų šaltinių NR milteliai gali turėti paslėptų stabilumo skirtumų dėl skirtingų kristalų formų.
Kokia tiksliai jo lydymosi temperatūra? – Atsakymas slypi „ikilydymosi skaidyme“
+
-
Literatūroje nekalbama apie „lydymosi tašką“, tik „lydymosi diapazonas+skilimas“. Tyrime buvo naudojama diferencinė skenavimo kalorimetrija (DSC) kartu su branduolinio magnetinio rezonanso vandenilio spektroskopija (¹H BMR), siekiant išsiaiškinti, kad nikotinamido ribozilo chloridas suyra lydymosi metu. Šaltasis mechanizmas: „lydymosi temperatūra“, kurią išmatuojate, iš tikrųjų yra terminio skilimo reakcijos pradžios taškas, o ne paprastas kietosios -skysčio fazės perėjimas. Todėl jo terminis įvykis turėtų būti apibūdintas kaip „lydymas kartu su skilimu“, o ne fiksuota lydymosi temperatūra.
Kodėl lentynoje „gerai“, o skrandyje – „savižudybė“?
+
-
Šarminė katalizuojama hidrolizė vyksta imituotame žarnyno skystyje, gaminant „pirmąjį priešą“ nikotinamidą. Pagrindinis skilimo mechanizmas yra šarminė katalizuojama hidrolizė: NRCl greitai skaidosi imituojamame žarnyno skystyje (pH artimas neutraliam šarminiam), suskaidydamas į nikotinamidą ir ribozę. Dar mažiau populiarus yra tai, kad skilimo produktas nikotinamidas gali neutralizuoti NR poveikį didinant NAD⁺. Taigi, NR turi ne tik užkirsti kelią skrandžio rūgščiai, bet ir žarnyno skysčiui -, formulė turi ją apsaugoti ir neleisti susidaryti skilimo produktams, sukeliantiems šią „duobės reakciją“.
Kodėl jo saugos vertinimas rodo atlaidumą nėščioms moterims?
+
-
Atidengta riba (MoE) 76 prieš 100 – beveik nepakanka. Europos maisto saugos tarnybos (EMST) 2019 m. nuomonėje teigiama, kad:
Paprastiems suaugusiems: remiantis kartotinių dozių toksiškumo tyrimais su žiurkėmis ir šunimis, nustatyta ekspozicijos riba (MoE) yra 70, o tai laikoma pakankamai saugia.
Nėščioms ir žindančioms moterims toksinio poveikio vystymuisi tyrimų su žiurkėmis metu nustatytas MOE yra 76. Kadangi trūksta duomenų, galinčių įrodyti, kad mažesnės nei 100 vertės yra priimtinos, 76 yra laikomi nepakankamais.
Išvada: kaip naujas maisto produktas, NR yra saugus paprastiems suaugusiems žmonėms (rekomenduojama viršutinė riba 300 mg per parą), tačiau nėščioms ir žindančioms moterims rekomenduojamas saugus suvartojimas sumažinamas iki 230 mg per parą. Tai nėra toksiška, tiesiog saugos riba nėra pakankamai plati.
Kas yra jos „paslėpta tapatybė“ biologinės gamybos srityje, be anti-senėjimo?
+
-
Tai efektyvios fermentacijos „žvaigždės produktas“ sintetinėje biologijoje, kurio išeiga siekia iki 11,33 g/l. Naujausi tyrimai (2023 m.) apie sistemingą Bacillus licheniformis modifikavimą:
Degradacijos genų (deoD/pupG) pašalinimas neleidžia pažeisti NR.
Šalutinio produkto kelio (pncA) pašalinimas sumažina nikotino rūgšties gamybą.
Nukleotidazės (YfkN) per didelė ekspresija skatina pirmtako NMN pavertimą NR.
Pirmą kartą buvo įrodyta, kad MdtL ištekėjimo siurblys (gautas iš Escherichia coli) gali žymiai paskatinti NR sekreciją.
Galiausiai optimizuotas štamas pasiekė 11,33 g/l išeigą ir 0,91 mol/mol nikotinamido NR konversijos koeficientą purtomose kolbose, o tai taip pat yra svarbus tikslinis produktas mikrobų ląstelių gamykloms.
Populiarus Žymos: nikotinamido ribosido injekcija, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, urmu, parduoti