Liraglutido milteliai CAS 204656-20-2

Liraglutido milteliai, molekulinė formulė C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, molekulinė masė 1209.40. Tai yra dirbtinai susintetintas acilintas žmogaus gliukagonas, pavyzdžiui, „Peptide-1“ (GLP-1) analogas, turintis daugiau nei 97% sekos panašumą, palyginti su natūraliu GLP-1. Gali būti ištirpintas vandenyje, etanolyje ir propilenglikolyje. Natūralios GLP-1 molekulės 34-oji lizino padėtis keičiama argininu, kuris ne tik išsaugo ir prailgina surišimo laiką tarp acilinimo produktų ir baltymų, bet ir žymiai įveikia lengvą GLP skaidymo trūkumą. Esant normalioms laikymo sąlygoms, jis pasižymi geru stabilumu, o jo vandeninis tirpalas gali išlaikyti fizinį ir cheminį stabilumą mažiausiai 2 metus.

Genetinis toksiškumas: Ameso rezultatai testasLiraglutido milteliai, Chromosomų aberacijos testas žmogaus periferinio kraujo limfocitų ir žiurkių mikrobranduolio testas buvo neigiami.

Reprodukcinis toksiškumas:

1. Žiurkės patinai buvo įšvirkšta po oda 0,1, 0,25 ir 1,0 mg/kg/d liraglutido 4 savaites prieš poravimosi ir poravimosi metu. Esant 1,0 mg/kg/d dozei, gyvūnų vaisingumas vyrams nebuvo tiesiogiai paveiktas. Remiantis plazmos AUC skaičiavimais, šios dozės sukeltas sisteminis poveikis buvo maždaug 11 kartų didesnis nei žmogaus ekspozicija esant maksimaliai rekomenduojamai žmogaus dozei (MRHD). Poodinis 1,0 mg/kg injekcija į žiurkių pateles padidino ankstyvą embriono mirtį, matomą svorio padidėjimą ir sumažėjo maisto vartojimas.

2. Nuo 2 savaičių prieš poravimuisi iki 17 -osios nėštumo dienos žiurkėms moterų, poodinės injekcijos buvo 0,1, 0,25 ir 1,0 mg/kg/D liraglutido. Remiantis plazmos AUC skaičiavimais, sisteminis poveikis, kurį sukelia šios trys dozės, buvo atitinkamai maždaug 0,8, 3 ir 11 kartų didesnė už žmogaus poveikį pagal MRHD. 1 mg/kg/d dozėje šiek tiek padidėjo ankstyvų embriono mirčių skaičius. Visomis dozėmis buvo pastebėtos vaisiaus anomalijos, inkstų ir kraujagyslių variacijos, netaisyklingas kaukolės osifikacija ir visiška per didelio osifikacijos būsena. Esant 1,0 mg/kg/d dozei, buvo pastebėta dėmėta kepenys ir nedidelis šonkaulių susukimas. Vaisiaus apsigimimų dažnis, viršijantis tą patį laikotarpį, ir istorinė kontrolė yra: burnos ir ryklės deformacijos ir (arba) stenozė, kai gerklės angoje yra 01 mg/kg/d dozė, ir bambos defektai, kai dozės yra 0,1 ir 0,25 mg/kg/d.

6–18 nėštumo dieną triušiai buvo įpurškiami liraglutidu, kai koncentracija buvo 0,01, 0,025 ir 0,05 mg/kg/d. Remiantis plazmos AUC skaičiavimais, sisteminis nėščių triušių poveikis buvo mažesnis nei MRHD metu. Visomis dozėmis vaisiaus svoris sumažėjo, o bendras sunkių vaisiaus anomalijų dažnis padidėjo priklausomai nuo dozės. Esant 0,01 mg/kg/d dozėms (inkstų, pečių ir blužnies kaulams), didesni arba lygi 0,01 mg/kg/d (akys ir priekiniai galūnės), 0,025 mg/kg/d (smegenys, uodegos ir slanksteliai, didelės kraujagyslės ir širdis), didesni nei 0,025 mg/kg/d. 0,05 mg/kg/d (parietalinė kaulas ir didelės kraujagyslės), apsigimimų dažnis viršijo šiuolaikinės ir istorinės kontrolės priemones. Kaukolėje ir apykaklėje, slanksteliuose ir šonkauliuose, sternume, dubens, dubens, dubens, coccyx ir pečių ir blužnies kauluose randami netaisyklingos osifikacijos ir (arba) skeleto anomalijos; Taip pat matomas nedidelis nuo skeleto variacija. Visceraliniai anomalijos randami kraujagyslėse, plaučiuose, kepenyse ir stemplėje. Visos gydymo grupės parodė dvigubas tulžies pūslės skiltis ar bifurkacijas, tačiau kontrolinėje grupėje panašios situacijos nepastebėta.

4. Per 24 dieną nuo 6 dienos nuo 6 dienos iki nujunkymo ar nutraukimo 24 dieną žiurkės moterys buvo įpuršktos 0,1, 0,25 ir 1,0 mg/kg/d liraglutido. Remiantis plazmos AUC skaičiavimais, sisteminis poveikis buvo maždaug 0,8, 3 ir 11 kartų didesnis nei žmogaus poveikis MRHD metu. Daugelio gydymo grupės gyvūnų gimdymo laikotarpis buvo šiek tiek atidėtas. Vidutinis naujagimių svoris gydymo grupėje buvo mažesnis nei kontrolinėje grupėje. Žiurkių moterys 1,0 mg/kg/d dozės grupėje pasireiškė kraujo praradimu ir jauduliu. Vidutinis F2 palikuonių žiurkių kūno svoris gydymo grupėje nuo gimimo iki 14 -osios dienos po gimimo buvo mažesnis nei kontrolinės grupės, tačiau skirtumai tarp grupių nepasiekė statistinio reikšmingumo.

Liraglutido milteliaiyra dirbtinai susintetintas acilintas žmogaus gliukagonas, pavyzdžiui, „Peptide-1“ (GLP-1) analogas, turintis daugiau nei 97% sekos panašumą, palyginti su natūraliu GLP-1. Liraglutido molekulinė struktūra apima šias pagrindines savybes: natūralios GLP-1 molekulės 34-ąją lizino padėtį pakeičia argininas, kuris ne tik išsaugo ir prailgina rišimo laiką tarp acilacijos produktų ir baltymų, bet ir žymiai perverčia GLP lengvojo skaidymo nepalankumą; Į 26-ąjį liziną buvo pridėta papildoma riebalų rūgščių šoninė grandinė, kuri padeda pratęsti acilinimo produktų pusinės eliminacijos periodą in vivo. Dėl šių unikalių molekulinių pokyčių delilaglutidas padarė puikų klinikinio gydymo poveikį, ypač sergant diabetu ir svorio metimu.

Cheminiai liraglutido sintezavimo metodai daugiausia apima šiuos veiksmus:

1. Fragmento sintezė

Pirmiausia visą liraglutidą padalinkite į kelis segmentus, kuriuos paprastai galima suskirstyti į penkis segmentus: nuo 1 iki 4 -osios aminorūgštys, nuo 5 iki 10 -osios aminorūgštys, nuo 11 iki 16 -osios aminorūgštys, nuo 17 iki 24 -osios aminorūgštys ir nuo 25 iki 31 -osios aminorūgštys. Kiekvienas fragmentas sintetinamas atskirai, o tai gali sumažinti peptidų sintezės sunkumus ir sąnaudas ir pagerinti sintezės efektyvumą.

Kiekvieno fragmento sintezei paprastai naudojami kietos fazės sintezės ar skysčio fazės sintezės metodai. Kietosios fazės sintezės metodas apima aminorūgščių karboksilo grupių sujungimą su derva, tada nuosekliai pridedant aminorūgščių prie dervos iš eilės ir galiausiai nupjaunant peptidus iš derva. Skysčio fazės sintezės metodas apima visų aminorūgščių ištirpinimą organiniame tirpiklyje ir po to kondensuojant juos iš eilės, kad susidarytų peptidų fragmentai.

2. Sujungimo reakcija

Atlikite 5 žingsnyje sintezuotų 5 peptidų fragmentų jungties reakciją, kad susidarytų visiškas liraglutidas. Sujungimo reakciją galima atlikti naudojant cheminius ar biologinius jungčių agentus, o specifinį metodą galima pasirinkti atsižvelgiant į faktinius poreikius.

Sukabinimo reakcijoje būtina sujungti kiekvieno fragmento amino grupę su kito fragmento karboksilo grupe. Norint tai pasiekti, paprastai reikia naudoti kondensacinius agentus, tokius kaip DIC ar BOP. Šie kondensaciniai agentai gali skatinti reakciją tarp amino ir karboksilo grupių, sudarydami peptidų ryšius. Sukabinimo reakcijoje taip pat reikia atkreipti dėmesį į reakcijos sąlygų, tokių kaip temperatūra, pH vertė ir reakcijos laikas, kontroliuoti, kad būtų užtikrintas sklandus reakcijos eiga.

3. Išvalymas ir identifikavimas

Susintetintą liraglutidą reikia išgryninti ir identifikuoti, kad būtų užtikrintas produkto grynumas ir kokybė. Valymas paprastai atliekamas naudojant tokius metodus kaip aukštos kokybės skysčių chromatografija (HPLC) arba elektroforezė, po to identifikuojama naudojant masės spektrometriją, branduolinį magnetinį rezonansą ir kitus metodus. Šiomis priemonėmis galima užtikrinti, kad sintezuoto produkto molekulinė masė ir seka atitiktų lūkesčius, ir nėra priemaišų ar šalutinių produktų liekanų.

4. Kitos modifikacijos

Be aukščiau pateiktų žingsnių, kartais reikia kitų modifikacijų, tokių kaip apsauginių grupių pridėjimas ar pašalinimas. Šie veiksmai taip pat yra būtini, nes jie gali apsaugoti aktyvias peptidų grupes nuo sunaikinimo arba atsiranda šalutinių reakcijų, pagerindami sintezuotos kokybės ir derlingumoLiraglutido milteliai.

Aukščiau pateikiami pagrindiniai cheminiai liraglutido sintezavimo metodai, tačiau, žinoma, praktiškai reikia atkreipti dėmesį į kai kurias detales ir metodus. Pvz., Pasirinkus tinkamą tirpiklių sistemą, kontroliuojant temperatūrą ir pH, ir naudojant tinkamus katalizatorius, visi gali paveikti sintezės efektyvumą ir produkto kokybę. Todėl atliekant praktinį veikimą, reikia atlikti koregavimus ir optimizavimą atsižvelgiant į konkrečias aplinkybes.

Liraglutidas (ilgai veikiantis GLP-1 receptorių agonistas) vaidina svarbų vaidmenį gydant diabetą. Norint užtikrinti jo kokybės kontroliuojamumą, būtina nustatyti mokslinius ir griežtus analitinius metodus ir atlikti sistemingą patvirtinimą, kad būtų užtikrintas šių metodų patikimumas. Ši analizė atliekama iš trijų aspektų: patvirtinimo elementų, patvirtinimo metodų ir pagrindinių valdymo taškų.

Pagrindiniai patikrinimo elementai ir techniniai reikalavimai

Specifiškumas

Tikslas: įrodyti, kad metodas gali atskirti liraglutidą nuo priemaišų, skilimo produktų ir pagalbinių medžiagų.

Įdiegimo strategija:

Chromatografija: naudokite HPLC-UV arba UPLC-MS. Atliekant priverstinius skilimo bandymus (tokius kaip aukšta temperatūra, šviesos ekspozicija, rūgščių bazės hidrolizė), sukuria skilimo produktus ir patikrinkite pagrindinės smailės ir priemaišų smailės atskyrimo laipsnį (didesnę arba lygi 1,5). Pavyzdžiui, tiriant ApoE-/- pelės modelį, po liraglutido oksiduojant, skilimo produktus (tokius kaip skruzdžių rūgšties adduktai) reikia patvirtinti chromatografine analize, kad būtų užtikrintas skilimo produktų atskyrimo poveikis iš pagrindinės smailės.

Spektroskopija: naudokite PDA detektorių, kad palygintumėte pagrindinės smailės ir priemaišų UV spektrus ir patvirtintumėte smailių grynumą.

Tuščias valdymas: patikrinkite, ar nėra klaidingų teigiamų signalų, naudojant mėginius be liraglutido (pvz., Pagalbinių tirpalų).

 

Tikslumas

Tikslas: užtikrinti, kad išmatuoti rezultatai būtų artimi tikrajai vertei, o atkūrimo greitis yra kontroliuojamas 98% - 102%.

Įdiegimo strategija:

Standartinis papildymo atkūrimo testas: pridėkite žinomą pamatinės medžiagos kiekį prie imties su žinomu liraglutido kiekiu ir išmatuokite atkūrimo greitį. Pavyzdžiui, analizuodami kompoziciją, pridėkite 0,5 mg/ml, 1,0 mg/ml ir 1,5 mg/ml liraglutido į tuščią pagalbinio tirpalą, pakartokite kiekvieną koncentraciją 3 kartus ir apskaičiuokite vidutinį atsigavimo greitį.

Palyginimo metodas: palyginkite su klasikiniais metodais (tokiais kaip titravimas) arba patikrintais metodais (tokiais kaip farmakopėjos metodai), o rezultato nuokrypis turėtų būti mažesnis arba lygus 2%.

 

Tikslumas

Tikslas: įvertinti pakartotinių matavimo rezultatų artumo laipsnį, kai RSD yra mažesnis arba lygus 2%.

Įdiegimo strategija:

Pakartojamumas: To paties analitiko, to paties instrumento ir tos pačios mėginių partijos atlikkite 6 iš eilės matavimus iš eilės ir apskaičiuokite RSD.

Tarpinis tikslumas: apskaičiuokite RSD nustatydami tą pačią pavyzdžių partiją skirtingų analitikų, skirtingų instrumentų ir skirtingų datų. Pavyzdžiui, nustatant liraglutido kiekį, RSD pakartojamumas turėtų būti mažesnis arba lygus 1,5%, o tarpinis tikslumas RSD turėtų būti mažesnis arba lygus 2,0%.

Atkuriamumas: Bendradarbiavimo patikrinimas pagal kelias laboratorijas (tokias kaip „Pharmacopoeia“ standartiniai metodai), RSD turėtų laikytis gairių principų.

 

Aptikimo riba ir kiekybinis įvertinimas

Tikslas: nustatyti minimalią koncentraciją, kurią metodas gali aptikti ir kiekybiškai įvertinti liraglutidą.

Įdiegimo strategija:

Signalo ir triukšmo santykio metodas: nustatykite LOD su 3: 1 signalo ir triukšmo santykiu ir nustatykite LOQ su 10: 1 signalo ir triukšmo santykiu. Pavyzdžiui, HPLC-UV metodu liraglutido LOD gali būti net 0,01 ug/ml, o LOQ yra 0,05 ug/ml.

Standartinis kreivės metodas: Apskaičiuokite LOD ir LOQ naudodamiesi mažos koncentracijos standartinių medžiagų atsako signalais (pvz., 0,1 ug/ml - 1 ug/ml).

 

Linijiškumas

Tikslas: įrodyti, kad atsako signalas yra proporcingas koncentracijai, o R² yra didesnis arba lygus 0,999.

Įdiegimo strategija:

Gradiento koncentracijos testas: Paruoškite 5–7 koncentracijos gradientus (tokius kaip 0,1 mg/ml - 2.0 mg/ml) standartinių tirpalų, išmatuokite smailės plotą ar atsako vertę ir nubrėžkite standartinę kreivę.

Liko analizė: Patikrinkite, ar likučiai yra atsitiktinai pasiskirstę ir nėra sisteminio nuokrypio.

 

Diapazonas

Tikslas: nustatyti taikomą metodo koncentracijos diapazoną, paprastai 120% LOQ iki viršutinės tiesiškumo ribos.

Įdiegimo strategija:

Turinio nustatymas: diapazonas nustatomas 80% - 120% pažymėtos sumos. Pvz., Liraglutido formulavimo turinio nustatymo diapazonas turėtų būti 0,4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Priemaišų kontrolė: Remiantis ICH Q3D gairėmis, nustatykite ribinį priemaišų diapazoną (pvz., Viena priemaiša mažesnė arba lygi 0,5%, bendra priemaiša, mažesnė arba lygi 2,0%).

Patvirtinimo dokumentai ir duomenų valdymas

01

Patvirtinimo planas ir ataskaita

Aiškiai apibrėžkite patvirtinimo elementus, metodus, priėmimo standartus ir nenormalias tvarkymo procedūras. Pvz., Jei tikslumas RSD viršija ribą, būtina ištirti prietaisų gedimus ar eksploatavimo klaidas.

Įrašykite pradinius duomenis (pvz., Chromatogramas, standartines kreives, atkūrimo greičio skaičiavimo lenteles), kad užtikrintumėte atsekamumą.

02

Stabilumo indikacijos metodo kūrimas

Privalomi skilimo bandymai turėtų apimti oksidaciją, šviesos poveikį, hidrolizę ir kt., Kad būtų galima imituoti faktines laikymo sąlygas. Pavyzdžiui, liraglutidas 48 valandas buvo 60 laipsnių, skilimo greitis turėtų būti didesnis arba lygus 10%, kad patikrintų metodo gebėjimą nustatyti skilimo produktus.

03

Reguliavimo laikymasis

Sekite ICH Q2 (R2), USP<1225>, ir Kinijos GMP gairės, skirtos užtikrinti, kad patvirtinimo elementai apimtų pagrindinius rodiklius, tokius kaip specifiškumas ir tikslumas.

Atliekant elementarią priemaišų analizę, ji turėtų atitikti ICH Q3D ir USP<233>Reikalavimai, kontroliuojantys 1 klasės elementų, tokių kaip kaip, CD ir PB, ribas.

Populiarus Žymos: „Liraglutide Powder CAS 204656-20-2“, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, biria