Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. yra vienas labiausiai patyrusių z-arg-leu-arg-gly-gly-amc cas 167698-69-3 gamintojų ir tiekėjų Kinijoje. Sveiki atvykę į mūsų gamykloje parduodamą didmeninį aukštos kokybės z-arg-leu-arg-gly-gly-amc cas 167698-69-3. Galimas geras aptarnavimas ir priimtina kaina.
Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC, molekulinė formulė C40H56N12O9, CAS 167698-69-3. Kaip peptidas, kaip peptidas, jis turėtų turėti bendrąsias peptidinių medžiagų savybes. Peptidai yra junginiai, susidarantys jungiant aminorūgštis peptidiniais ryšiais ir gerai tirpsta vandenyje, nes peptidinės grandinės polinės grupės (pvz., amino ir karboksilo grupės) gali sudaryti vandenilinius ryšius su vandens molekulėmis.
Be to, peptidinės medžiagos dažniausiai pasižymi dideliu biologiniu aktyvumu ir gali dalyvauti įvairiuose biologiniuose procesuose. Jis plačiai naudojamas biochemijos ir medicinos tyrimuose, įskaitant SARS-CoV PLpro peptido substrato, fluorescencinių zondų, didelio-našumo inhibitorių atrankos įrankius, baltymų sąveikos tyrimų reagentus ir imunologinius reagentus. Šios programos ne tik padeda atskleisti biologinių procesų esmę ir mechanizmus, bet ir suteikia naujų idėjų bei metodų vaistų kūrimui ir ligų gydymui.
|
Individualūs butelių kamšteliai ir kamšteliai:
|
|
|
Cheminė formulė |
C32H51N11O9 |
|
Tikslios Mišios |
733 |
|
Molekulinė masė |
734 |
|
m/z |
733 (100.0%), 734 (34.6%), 735 (3.1%), 735 (2.7%), 734 (2.2%), 735 (1.8%), 734 (1.8%), 735 (1.4%) |
|
Elementų analizė |
C, 52.38; H, 7.01; N, 21.00; O, 19.62 |
Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC, kaip specifinė peptidinė medžiaga, turi platų pritaikymo spektrą biochemijos ir medicinos tyrimuose.
Pirmiausia
Jis dažnai naudojamas kaip SARS{0}}CoV PLpro (sunkaus ūminio kvėpavimo sindromo koronaviruso papajų, panašių į proteazę) peptidinis substratas. SARS-CoV yra koronavirusas, o jo PLpro yra pagrindinis viruso replikacijos proceso fermentas, dalyvaujantis viruso polimerinių baltymų apdorojime. Todėl ji turi svarbią taikymo vertę tiriant SARS-CoV replikacijos mechanizmą, tikrinant antivirusinius vaistus ir kuriant vakcinas.
Antra
Jis taip pat gali būti naudojamas kaip fluorescencinis zondas biologiniam vaizdavimui ir ląstelių lokalizacijos tyrimams. Dėl AMC (aminometilkumarino) grupės šis peptidas pasižymi fluorescencinėmis savybėmis ir gali skleisti fluorescenciją sužadinimo metu. Tai leidžia ženklinti specifines molekules ar struktūras ląstelėse ir audiniuose, taip atskleidžiant dinaminius biologinių procesų pokyčius.
Be to
Jis taip pat gali būti naudojamas didelio{0}}našumo inhibitorių patikrai ir nuolatinei analizei. Vaistų kūrimo procese labai svarbu rasti junginių, kurie galėtų veiksmingai slopinti specifinių fermentų ar baltymų aktyvumą. Kaip PLpro peptidinis substratas, jis gali būti naudojamas kartu su potencialiais inhibitoriais, siekiant įvertinti jų aktyvumą, matuojant substrato hidrolizės greičio pokyčius. Šis metodas turi didelio našumo, didelio jautrumo ir didelio specifiškumo privalumus, kurie gali labai paspartinti vaistų patikros procesą.
Pagaliau
Be to, jis gali būti taikomas ir imunologiniams tyrimams. Peptidinės medžiagos vaidina svarbų vaidmenį imuninėje sistemoje ir gali dalyvauti imuniniame atsake kaip antigenai arba antikūnai. Specifinė Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC seka ir struktūra gali suteikti jam imunogeniškumo arba imunoreaktyvumo, todėl jis tinkamas gaminti antikūnus, vakcinas arba imunodiagnostikos reagentus.
Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMCyra bioaktyvus peptidas, dažniausiai naudojamas biomedicinos tyrimams ir vaistų kūrimui. Toliau pateikiami išsamūs Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC sintezės laboratorinio metodo žingsniai ir atitinkamos cheminės lygtys:
1 veiksmas
Pasirinkite tinkamą operatorių:
Naudokite atitinkamą laikiklį (pvz., Rink Amide MBHA dervą), kad pritvirtintumėte galutinę AMC grupę ant laikiklio.
2 veiksmas
Nuosekli polipeptidinių grandinių sintezė:
Naudojant Fmoc solid{0}}fazės sintezės strategiją, Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY likučiai buvo nuosekliai pridedami prie nešiklio AMC grupės fiksuoto galo. Kiekvienos liekanos pridėjimas apima šiuos veiksmus:
-Apsaugos pašalinimas: pašalinkite Fmoc apsauginę grupę ir atskleiskite aminorūgšties laisvąją amino grupę.
-Sujungimas: naujų peptidinių ryšių susidarymas tarp aktyvuotų aminorūgščių esterių ir laisvųjų amino grupių ant nešiklio.
3 veiksmas
Nuimkite apsauginį pagrindą:
Kai polipeptidinės grandinės sintezė bus baigta, pašalinkite Fmoc apsauginę grupę N- gale ir atskleiskite laisvąją amino grupę gale.
4 veiksmas
Pašalinkite polipeptidines grandines:
Pašalinkite polipeptidinę grandinę nuo nešiklio ir kartu pašalinkite visas šoninės grandinės apsaugines grupes.
5 veiksmas
Aminoacilinimas:
Ištirpinkite susintetintą peptidą tinkamame tirpiklyje, pavyzdžiui, DMF, ir pridėkite atitinkamą kiekį formamido (HONHCOCH3) karbamoilinimo reakcijai. Šiame žingsnyje kiekvienos arginino liekanos šoninėse grandinėse bus pateiktos Z-apsauginės grupės.
6 veiksmas
Z apsauginio pagrindo nuėmimas:
Naudokite tinkamus apsauginius reagentus, tokius kaip TFA (trifluoracto rūgštis), kad pašalintumėte Z-apsauginę grupę iš arginino liekanos ir atskleistumėte laisvuosius radikalus jo šoninėse grandinėse.
7 veiksmas
Aminometilinimas:
Ištirpinkite peptidą su pašalinta Z apsaugine grupe atitinkamame tirpiklyje, įpilkite atitinkamą kiekį metanolio amino (MeNH2) ir atlikite aminometilinimo reakciją. Šis žingsnis įves metilinimą kiekvienos arginino liekanos šoninėse grandinėse.
8 veiksmas
Neapdorotų produktų valymas:
Naudojant atitinkamus chromatografijos metodus, pvz., atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografiją, susintetinti peptidai išvalomi iš neapdorotų produktų, kad būtų pašalintos priemaišos ir nesureagavusios medžiagos.
9 veiksmas
Valymas:
Tolesnis neapdoroto produkto gryninimas atliekamas naudojant aukštesnio -lygio chromatografijos metodus, pvz., atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografiją arba chromatografiją kolonėlėje, kad būtų gaunamas didesnis grynumas.
10 veiksmas
Identifikavimas:
Išgrynintų peptidų struktūrai ir grynumui nustatyti naudokite masės spektrometrijos metodus (pvz., masių spektrometrijos analizę) ir chromatografijos metodus (pvz., didelio{0}}našumo skysčių chromatografiją).
Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC yra proteazių aptikimo „auksinis standartas“
Biochemijos ir molekulinės biologijos tyrimų srityse proteazės aktyvumo nustatymas yra pagrindinis žingsnis iššifruojant ląstelių signalizaciją, ligos mechanizmus ir vaistų kūrimą. Tradiciniai aptikimo metodai, tokie kaip kolorimetriniai ir radioaktyviai pažymėti metodai, yra sunkiai patenkinami šiuolaikinių tyrimų poreikius dėl mažo jautrumo, sudėtingo veikimo ar galimų pavojų saugai.Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC(sutrumpintai kaip Z-LRGG-AMC), kaip fluorescenciniu būdu pažymėtas peptidinis substratas, tapo „auksiniu standartu“ proteazių aptikimui dėl didelio jautrumo, specifiškumo ir stebėjimo realiuoju laiku{2}}.
Veikimo mechanizmas: tikslus fluorescencinių signalų konvertavimas
Z-LRGG-AMC veiksmų procesą galima suskirstyti į tris etapus:
Proteazės, tokios kaip SARS{0}}CoV papainas, kaip proteazė PLpro, specifiškai jungiasi prie substrato peptidų sekų per katalizinę triadą (Cys His Asp) aktyviajame centre. Pavyzdžiui, PLpro teikia pirmenybę Arg-X-Arg-Gly sekų atpažinimui, kur X yra hidrofobinė aminorūgštis (pvz., Leu).
Proteazė katalizuoja peptidinių jungčių tarp Arg Leu hidrolizę, išskirdama AMC fluorescencines grupes. Pjovimo reakcijos kinetika atitinka Mie lygtį, o fluorescencijos intensyvumas laikui bėgant didėja tiesiškai, o nuolydis atspindi fermento aktyvumą.
460 nm fluorescencijos emisijos intensyvumo stebėjimas realiuoju laiku naudojant fluorescencijos spektrofotometrą arba mikroplokštelių skaitytuvą. Pavyzdžiui, atliekant SARS CoV tyrimus, PLpro aktyvumą galima kiekybiškai išanalizuoti nustatant fluorescencinį signalą, sugeneruotą Z-LRGG-AMC skilimo, jautrumo Dana moliniu lygiu.
Taikymo scenarijus: kelių sričių moksliniai įrankiai
Virusinės proteazės tyrimai: pagrindinė antikoronavirusinių vaistų kūrimo priemonė
PLpro yra atsakingas už viruso poliproteinų apdorojimą ir šeimininko imuninį pabėgimą bei yra pagrindinis antivirusinių vaistų taikinys. Z-LRGG-AMC, kaip specifinis PLpro substratas, turi daugiau nei tris kartus didesnį skilimo efektyvumą nei tradiciniai substratai, tokie kaip Z-Gly-Gly Arg AMC. Atliekant vaistų patikrą, galimus antivirusinius vaistus galima greitai nustatyti nustatant junginių slopinimo greitį PLpro skaidant Z-LRGG-AMC.
For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>90 % iš 100 000 junginių bibliotekos, teikiančios pagrindinę paramą kuriant antivirusinius vaistus, tokius kaip remdesiviras. Palyginus skirtingų virusų padermių PLpro pjovimo efektyvumą su Z-LRGG-AMC, galima atskleisti viruso kitimo poveikį proteazės aktyvumui. Pavyzdžiui, SARS-CoV-2 PLpro pjovimo greitis naudojant Z-LRGG-AMC yra 1,5 karto greitesnis nei SARS-CoV PLpro, o tai rodo, kad jis gali turėti stipresnį šeimininko imuninį reguliavimą.
Ubikvitinazės tyrimas: baltymų skilimo reguliavimo zondas
IPaseT ir kiti DUB reguliuoja baltymų skaidymą, skaidydami ubikvitino C-galinę seką. Z-LRGG-AMC imituoja C-galinę ubikvitino struktūrą, kurios kcat/Km vertė yra 18 M⁻¹ s⁻¹, todėl tai yra idealus substratas tiriant DUB kinetiką. Pavyzdžiui, atliekant vėžio tyrimus, ryšį tarp baltymų homeostazės disbalanso ir naviko progresavimo galima įvertinti nustatant DUB skilimo aktyvumą Z-LRGG-AMC naviko ląstelėse.
Kartu su fluorescencinio rezonanso energijos perdavimo (FRET) technologija Z-LRGG-AMC gali būti naudojamas intraląstelinės ubikvitinacijos modifikavimo procesams realiuoju laiku-sekti. Pavyzdžiui, neurodegeneracinės ligos modelyje alfa sinukleino ubikvitinacijos lygio nustatymas atskleidžia ryšį tarp jo agregacijos ir proteasomų disfunkcijos.
Didelio našumo vaistų patikra: naujų vaistų kūrimo spartinimas
384 šulinėlių plokštelėje Z-LRGG-AMC buvo sumaišytas su bandomuoju junginiu, o fermentų inhibitoriai buvo greitai patikrinti pagal fluorescencinio signalo pokyčius. Šis metodas turi didelį pralaidumą (gali patikrinti tūkstančius junginių per dieną) ir mažą kainą (vienos poros kaina).<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.
Dažnai užduodami klausimai
Ar jis visiškai ištirpęs DMSO, ar atrodo, kad jis ištirps? – Plika akimi nematomas sukčiavimas
+
-
Tai yra „užmaskavimo meistras“ DMSO -, skaidrus, kai pirmą kartą ištirpsta, tačiau, sukeldamas nedidelius vandens kiekius, lėtai nusodina nanoskalės nuosėdas, kurios visiškai neatpažįstamos plika akimi. Nors tirpumo duomenyse teigiama, kad „tirpsta DMSO“, peptidiniai substratai yra labai jautrūs likutiniams vandens kiekiams DMSO. Tikras šaltas žinojimas yra tas, kad tinkamiausias jo tirpiklis yra ne DMSO, o 10% acto rūgšties tirpalas. Ši pagrindinė informacija retai pasirodo įprastuose produktų puslapiuose ir yra „gudrybė“, padedanti išspręsti „prasto rezultatų atkuriamumo“ ir „signalo dreifo“ problemas.
Bijo ne šviesos, o fizinės žalos „užšalimo“ metu? – Ypatingas AMC grupių „skausmo pojūtis“.
+
-
Pakartotinis užšaldymas ir atšildymas jam prilygsta „fiziniam kankinimui“, net jei jis ir nesuyra, susikaupusios molekulės praras substrato aktyvumą. Nors pati AMC grupė yra atspari šviesai, peptidas yra labai jautrus negrįžtamai agregacijai dėl ledo kristalų suspaudimo per pasikartojančius užšalimo{1}}atšildymo ciklus. Pramonės standarto rekomendacija: tirpalą galima laikyti 6 mėnesius -80 °C temperatūroje ir tik 1 mėnesį -20 °C temperatūroje. Atšildžius likusį motininį tirpalą reikia nedelsiant supakuoti arba išmesti. Staigus signalo trūkumas, su kuriuo susidūrėte, greičiausiai atsirado dėl „klaidingos mirties“ reiškinio, kurį sukelia užšalimo ir atšildymo ciklai.
Kas yra Z-Leu-Arg Gly Gly AMC „biologinis sūnus“?
+
-
Z-LRGG-AMC (tetrapeptidas) yra „universalus ubikvitinazės substratas“, o Z-RLRGG-AMC (pentapeptidas) yra „specializuotas raktas“ heteropeptidazei T ir SARS virusui PLpro.
Nors jie abu paprastai vadinami „ubikvitino fermento substratais“, jie labai skiriasi:
Z-LRGG-AMC: imituoja ubikvitino C-galą ir daugiausia naudojamas universaliam UCH šeimos aptikimui (pvz., UCH-L3).
Z-RLRGG-AMC: buvo pridėtas papildomas Arg, todėl jis yra specifinis pageidautinas substratas deubikvitinazei USP5 ir SARS koronavirusui PLpro.
Kodėl į reakcijos buferį reikia pridėti DTT (ditiotreitolio)? -- Aktyvaus cisteino „cheminis gelbėjimosi simbolis“.
+
-
Jei nebus pridėtas pakankamas reduktorius (pvz., DTT), jo skilimo vieta „aprūdys“ per kelias minutes, paversdama substratą „negyva medžiaga“.
Jo hidrolizė priklauso nuo laisvo cisteino (Cys) fermento aktyviame centre. Tiolio grupę lengvai oksiduoja oras, kad susidarytų disulfidiniai ryšiai (- S-S -), todėl fermentas inaktyvuojamas. Standartinėje reakcijos sistemoje (pvz., HEPES buferyje, pH 7,4) turi būti 1-5 mM DTT. Ši" nerašyta taisyklė "dažnai minima tik mažose simbolių anotacijose ar metodinėse detalėse ir yra dažniausia kaltininkė, dėl kurios pradedančiųjų eksperimentų fermentai yra neaktyvūs, nesvarbu, kiek jų būtų pridėta".
Populiarus Žymos: z-arg-leu-arg-gly-gly-amc cas 167698-69-3, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, pirkti, kaina, urmu, parduoti